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冷藏
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长期
- 库存:
579
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
60μl
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售EMSA突变探针-SP1(1.75μM) 凝胶迁移EMSA,我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
EMSA突变探针-SP1(1.75μM) 凝胶迁移EMSA
品牌:百奥莱博
编号:YT251
规格:60μl
产地:国产|进口
EMSA突变探针-SP1是用于EMSA(也称gel shift)研究的SP1 consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针-SP1的阴性对照,用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。
EMSA突变探针-SP1的序列如下:
5"-ATT CGA TCG GTT CGG GGC GAG C-3"
3"-TAA GCT AGC CAA GCC CCG CTC G-5"
EMSA突变探针-SP1中SP1的公认的结合位点发生了突变,从而使SP1无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中,正常的标记探针和SP1的结合的条带会被抑制;而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中,正常的标记探针和SP1的结合的条带不会被抑制。
1,阴性对照反应(标记探针);2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针);3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记探针);4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记突变探针);5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+目的转录因子的特异抗体)。
一个包装的突变探针,如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应,可以进行30-60个突变探针的冷竞争反应。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
避免加热到40℃以上,温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
我公司的EMSA突变探针-SP1(1.75μM) 凝胶迁移EMSA,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销售下列产品:
·EMSA突变探针-NF-κB(1.75μM)
编号:YT231
规格:60μl
EMSA突变探针-NF-κB是用于EMSA(也称gel shift)研究的NF-κB consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针-NF-κB的阴性对照,用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。
EMSA突变探针-NF-κB的序列如下:
5"-AGT TGA GGC GAC TTT CCC AGG C-3"
3"-TCA ACT CCG CTG AAA GGG TCC G-5"
EMSA突变探针-NF-κB中NF-κB的公认的结合位点发生了突变,从而使NF-κB无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中,正常的标记探针和NF-κB的结合的条带会被抑制;而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中,正常的标记探针和NF-κB的结合的条带不会被抑制。
1,阴性对照反应(标记探针);2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针);3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记探针);4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记突变探针);5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+目的转录因子的特异抗体)。
一个包装的突变探针,如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应,可以进行30-60个突变探针的冷竞争反应。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
避免加热到40℃以上,温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
EMSA突变探针-SP1(1.75μM) 凝胶迁移EMSA关键词:EMSA突变探针-SP1,YT251,1.75μM
·ATP检测试剂盒
编号:YT361
英文名称:ATP Assay Kit
规格:200次
ATP检测试剂盒(ATP Assay Kit)可以用于检测普通溶液、细胞或组织内的ATP(adenosine 5"-triphosphate)水平。细胞和组织样品一步裂解即可完成样品制备,检测灵敏度高达1nmol/L,化学发光可以持续稳定达30分钟,并且获得的样品还可以同时进行Western检测。
ATP,作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变,会影响细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下,ATP水平会下降,而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降,在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。
样品制备非常简单。本试剂盒提供了可以用于细胞和组织裂解的ATP检测裂解液,简单裂解后即可用于ATP检测。无需进行高氯酸或三氯乙*(代"酸")(TCA)抽提,或样品裂解后的煮沸等繁琐操作。
本试剂盒根据萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)催化荧光素产生荧光时需要ATP提供能量研制而成。 当萤火虫荧光素酶和荧光素都过量时,在一定的浓度范围内荧光的产生和ATP的浓度成正比。这样就可以高灵敏地检测溶液中的ATP浓度。本试剂盒在样品体积为100微升时可以检测浓度低达1nmol/L的ATP。而常规的细胞或组织裂解液中ATP的浓度仅为0.1-1μmol/L,一些常见细胞的细胞内ATP水平约为10nmol/mg蛋白。并且本试剂盒的检测浓度范围非常大,检测上限可以高达10μmol/L,并在5nmol/L-10μmol/L范围内可以形成良好的标准曲线。
本试剂盒进行了特殊的优化设计,使检测ATP时的化学发光非常稳定。对于ATP标准曲线的检测结果显示,在开始反应后10分钟内化学发光无明显下降,开始反应后30分钟内化学发光的下降不超过10%。
使用本试剂盒中的ATP检测裂解液裂解获得的细胞或组织样品,不仅可以用于ATP检测,还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些常规的较易溶解蛋白的Western检测。
本试剂盒的使用方便快捷,通常10-20个样品可以在30-60分钟内测定完毕。
本ATP检测试剂盒的检测灵敏度低于S0027,但高于S0026B;本试剂盒对于一些特殊样品的兼容性低于S0026B。
一个包装的本试剂盒至少可以检测200个样品。
保存条件:
-20℃保存,半年有效。-70℃保存,一年有效。ATP检测试剂需避光保存。
注意事项:
ATP检测试剂中含有荧光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试ATP检测试剂反复冻融5次对于其检测效果无明显影响,为取得较好的使用效果,建议用户使用时的冻融次数不宜超过3次。ATP检测试剂稀释成ATP检测工作液后,最好一次用完,不宜冻存后再使用。
ATP,特别是裂解后样品中的ATP在室温不太稳定,需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以稳定长达6小时。
本试剂盒需使用luminometer,即化学发光仪(检测荧光素酶报告基因时所用的仪器)。如果没有luminometer,也可以使用液闪仪。液闪仪的测定效果取决于液闪仪的检测灵敏度和检测精度。
使用可检测化学发光的多功能酶标仪时,所用96孔板宜为孔和孔之间不透光的黑板或白板。如使用常规的透明96孔板,需特别注意正确设置酶标仪测定时板子的类型,同时也可以在检测孔之间设置间隔孔,以尽量避免邻近孔之间的相互干扰。
本试剂盒提供的ATP检测裂解液可以有效裂解并释放常见的培养细胞和组织中的ATP。对于一些特殊的组织或样品,如果发现检测出来的ATP水平显著低于预期水平,可以在裂解样品后并且在离心前,取部分样品煮沸2分钟以充分释放ATP。煮沸后样品中的蛋白会变性,从而会在后续的离心步骤中被沉淀,因此煮沸的样品不能用于蛋白浓度测定、SDS-PAGE和Western检测。可以使用剩余的部分样品进行蛋白浓度测定、SDS-PAGE和Western检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
EMSA突变探针-SP1(1.75μM) 凝胶迁移EMSA关键词:EMSA突变探针-SP1,YT251,1.75μM
·SDS裂解液
编号:YT039
英文名称:SDS Lysis Buffer
规格:100ml
SDS裂解液是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等。
SDS裂解液的主要成分为50mM Tris(pH8.1),1% SDS,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用我公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
需自备PMSF。PMSF(ST506)可以向我公司订购。
裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
选择合适的裂解液;另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
·细胞膜绿色荧光探针
编号:YT174
英文名称:DiO
规格:10mg
DiO即DiOC18(3),全称为3,3′-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate,是最常用的细胞膜荧
光探针之一,呈现绿色荧光。DiO是一种亲脂性膜染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。
DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiO被激发后可以发出绿色的荧光,DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。其中,最大激发波长为484nm,最大发射波长为501nm。
DiO的分子式为C53H85ClN2O6,分子量为881.72,CAS number为34215-57-1。
DiO可以溶解于无水乙醇、DMSO和DMF,溶解度约为1-2.5mg/ml。发现较难溶解时可以适当加热,并用超声处理以促进溶解。
DiO被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。DiO通常不会明显影响细胞的生存力(viability)。DiO对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI,有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。
DiO除了最简单的细胞膜荧光标记外,还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
用于细胞膜荧光标记时,DiO的常用浓度为1-30μM,最常用的浓度为5-10μM。DiO可以直接染色活的细胞或组织,染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织,通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
保存条件:
4℃避光保存,一年有效。配制的储存液-20℃避光保存,半年有效。
注意事项:
荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
我公司正在优惠促销凝胶迁移EMSA等系列产品,期待您的咨询选购EMSA突变探针-SP1(1.75μM) 凝胶迁移EMSA。
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文献和实验。 5. 电泳分析:EMSA的典型分析结果可以参见下面的图1。 图1. 一个典型的EMSA/Gel-Shift分析图 1,阴性对照反应(标记探针);2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针);3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记探针);4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记突变探针);5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+目的转录因子的特异
1. 图1. 一个典型的EMSA/Gel-Shift分析图 1,阴性对照反应(标记探针);2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针);3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记探针);4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记突变探针);5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+目的转录因子的特异抗体). (1) 用0.5XTBE作为电泳
实验时间 | 还在为凝胶迁移实验(EMSA)发愁?老司机为你指路
烯酰胺凝胶。加入 TEMED 前先混匀,加入 TEMED 后立即混匀,并马上加入到制胶的模具中。避免产生气泡,加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡,可以把一块制胶的玻璃板进行硅烷化处理。04 EMSA 结合反应如下设置 EMSA 结合反应(1)阴性对照反应:体系为 10 微升;Nuclease-Free Water :7 微升;EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5×):2 微升;细胞核蛋白或纯化的转录因子: 0 微升;标记好的探针 :1 微升。(2)样品反应(3)探针冷竞争反应(4)突变探针的冷
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