YT233型EMSA探针-OCT-1(1.75μM)价格

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YT233型EMSA探针-OCT-1(1.75μM)价格
品牌：百奥莱博
规格：60μl
编号：YT233
产地：国产|进口

EMSA探针－OCT-1是用于EMSA(也称gel shift)研究的OCT-1 consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的OCT-1结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。
OCT-1 consensus oligo的序列如下：
5"-TGT CGA ATG CAA ATC ACT AGA A-3"
3"-ACA GCT TAC GTT TAG TGA TCT T-5"
本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。
一个包装的探针可以进行约30个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行20个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争(cold competition)，可以进行30-60个冷竞争反应。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。


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·SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)
编号：YT049
英文名称：SDS-PAGE Sample Loading Buffer，5X
规格：15ml

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，是一种经过改良的以溴酚蓝为染料，5倍浓缩的蛋白上样缓冲液。
可以用于常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。
保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。
注意事项：
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT，有轻微刺激性气味，但不含剧毒的巯基乙醇。
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)必须完全溶解后再使用。

使用说明：
1. 在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(5X)。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。
2. 按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液(5X)的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。
3. 100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。
4. 冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。
5. 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

·Monensin(蛋白转运抑制剂)
编号：YT336
英文名称：SDS-PAGE Sample Loading Buffer，5X
规格：100mg

Monensin是一种离子载体(ionophore)，可以破坏高尔基体，抑制细胞内的蛋白转运，常用作蛋白转运抑制剂。Monensin也常被用于抑制细胞因子等分泌型蛋白的分泌，也用于免疫染色时通过抑制分泌来增强分泌型蛋白的染色。Monensin作为离子载体，可以选择性结合单价阳离子入Li+、Na+、K+、Rb+、Ag+和Tl+，并把这些阳离子转运到细胞膜内。由于可以抑制蛋白转运，Monensin也被用作抗菌、抗疟等抗微生物活性(antimicrobial activity)。
本Monensin为钠盐，Monensin钠盐的分子量为692.9，分子式为C36H61O11•Na，CAS Number：22373-78-0。本产品为进口分装，纯度大于95%。
Monensin可溶于DMSO(25mg/ml)，乙醇(25mg/ml)和甲醇(50mg/ml)，微溶于水。
保存条件：
4℃或-20℃保存。
注意事项：
Monensin有毒(toxic)，请注意小心防护。



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·EMSA突变探针-AP1(1.75μM)
编号：YT196
规格：60μl

EMSA突变探针－AP1是用于EMSA(也称gel shift)研究的AP1 consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针－AP1的阴性对照，用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。
EMSA突变探针－AP1的序列如下：
5’-CGC TTG ATG ACT TGG CCG GAA-3’
3’-GCG AAC TAC TGA ACC GGC CTT-5’
EMSA突变探针－AP1中AP1的公认的结合位点发生了突变，从而使AP1无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和AP1的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中，正常的标记探针和AP1的结合的条带不会被抑制。
1,阴性对照反应(标记探针)；2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。
一个包装的突变探针，如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应，可以进行30-60个突变探针的冷竞争反应。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。



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·EMSA突变探针-β-Catenin/TCF(1.75μM)
编号：YT216
规格：60μl

EMSA突变探针－β-Catenin/TCF是用于EMSA(也称gel shift)研究的β-Catenin/TCF consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针－β-Catenin/TCF的阴性对照，用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。
EMSA突变探针－β-Catenin/TCF的序列如下：
5’-CCC TTT GGC CTT ACC-3’
3’-GGG AAA CCG GAA TGG-5’
EMSA突变探针－β-Catenin/TCF中β-Catenin/TCF的公认的结合位点发生了突变，从而使β-Catenin/TCF无法和该突变 探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和β-Catenin/TCF的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中，正常的标记探针和β-Catenin/TCF的结合的条带不会被抑制。
1,阴性对照反应(标记探针)；2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。
一个包装的突变探针，如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应，可以进行30-60个突变探针的冷竞争反应。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。


·一步法感受态细菌制备试剂盒
编号：YT022
英文名称：One Step Competent Cell Preparation Kit
规格：200次

一步法感受态细菌制备试剂盒是一种用于大肠杆菌感受态细菌快速制备的试剂盒。一步法感受态细菌制备试剂盒是在经典的TSS法的基础上进行适当改良而成，既继承了TSS法的快速和简便，又在此基础上提高了感受态细菌的转化效率和易操作性。使用本试剂盒可以使感受态效率达到106以上。不仅可以转化质粒，而且可以转化普通的连接产物。另外，对细菌的培养条件要求比较宽松，培养的细菌只要处于对数期内就可以使用本试剂盒制备感受态细菌。
使用本试剂盒操作非常简单，细菌培养好后仅需十几分钟就可以完成感受态细菌的制备。
本试剂盒适用于绝大部分常见的大肠杆菌，包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。对于一些用于蛋白表达或病毒质粒构建的特殊大肠杆菌也适用，制备出来的感受态菌转化质粒肯定没有问题，但如果转化连接产物有时效果不如DH5α等其它常见的细菌。
本试剂盒提供了DH5α甘油菌作为菌种，可以用于制备感受态细菌。
本试剂盒可以分多次使用，共可以制备足够进行200-400次转化的感受态细菌。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
需自行配制LB液体培养基和LB平板以用于细菌的培养和感受态效率的检测。
尽管经过我们的测试凡是处于对数期内的细菌都可以用于感受态细菌的制备，但如果细菌生长的OD600的值达到0.3-0.5左右时，制备出来的感受态效果最佳。
在制备感受态细菌的过程中均使用不含抗生素的LB。在使用感受态菌的过程中热休克后的37℃培养时也必须使用无抗生素的LB，即便转入的质粒是有抗性的。

使用说明：
1. 涂平板：
为取得最佳的感受态效率，必须先把甘油菌或其它形式保存的菌种涂LB平板，并培养过夜。
2. 接种：
取一有新鲜培养的菌种的LB平板，后续操作均在超净台内进行。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，从平板上挑取一个单克隆，然后把蘸有菌种的塑料枪头或牙签放到装有3毫升LB的细菌培养试管内。上述操作也可以使用接种环等进行操作。
3. 培养：
37℃约200rpm培养过夜，通常培养时间控制在16小时左右为宜。绝对不宜超过18小时。
4. 再接种培养：
根据需要制备的感受态细菌的量，按照1:100的比例用新鲜培养的过夜菌接种培养。例如取500微升的新鲜过夜菌到50毫升的LB中继续37℃约200rpm培养。通常在大约培养2-2.5小时后OD600可以达到0.3-0.5。
5. 制备感受态细菌：
在培养的细菌OD600达到0.3-0.5时，4℃2000g离心5分钟收集细菌。 如果离心沉淀前的菌量为50毫升，按后续操作进行，如果是其它体积则按比例换算后进行后续操作。用5毫升预冷的LB重新悬浮起细菌沉淀，加入5毫升在冰浴或冰水浴上融解的感受态制备试剂，混匀，冰浴放置5分钟。然后再轻轻混匀，根据实验需要适当分装到1.5毫升或0.5毫升的离心管内后-70℃保存。
注：如果以后会只做单管的转化，可以分装成每管最少50微升或100微升，如果以后一次性做多个转化，可以每管分装500微升或更大体积。-70℃保存后，感受态的效率会随时间的推移逐渐下降，但通常在半年内使用转化效率下降不会太多。总的来说，新鲜制备的感受态要比冻存的感受态转化效率更高一些。
6. 感受态细菌的使用：
(1)对于感受态细菌效率的测定或连接产物的转化(其它如基因突变产物的转化等参考连接产物进行)：
a)在冰上缓慢融解感受态细菌(对于新鲜制备的感受态就可以直接使用了)，如果检测感受态细菌的效率，加入100pg-10ng质粒，但质粒的体积不宜超过感受态细菌量的10%。如果转化连接产物，每100微升感受态细菌加入10微升连接产物。
b)轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒或连接产物。冰浴或冰水浴放置30分钟。
c)42℃水浴，热休克2分钟。
d)热休克后立即置于冰水浴中，2分钟。
e)加入900微升LB，37℃200rpm培养1小时。
f)如果检测感受态效率，取100微升涂布到含有相应抗生素的LB平板上。如果转化的是连接产物，2000-3000g离心1分钟或更长时间使细菌充分沉淀下来。去除约900-950微升LB培养液。细菌沉淀用余下的LB培养液重悬，然后全部涂布到含有适当抗生素的LB平板上。37℃培养过夜。
(2)对于质粒的转化：
a)融解感受态细菌，加入不少于50ng质粒到50或100微升感受态细菌中。质粒的量可以是1微克或更多，但体积不宜超过感受态细菌量的10%。
b)轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒。冰浴或冰水浴放置10分钟。
c)取全部菌液直接涂布到含有适当抗生素的LB平板上，37℃培养过夜。

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