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- 2025年07月14日
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文献和实验/ml.结果都没长出细胞，空载体对照也没长出。载体是pPIC9K。我用电转，涂于MD固体培养基，发现转化效率较低，每块板长出十几个点，是否是转化效率低导致的?谢谢指教! 参考见解：不知道你的转化条件是否得到优化?我认为您是否可以从以下几点入手： (1)挑取酵母单菌落，接种至含有5ml YPD培养基的50ml三角瓶中，30℃、250~300r/min培养过夜;取100~500μl的培养物接种至含有500ml新鲜培养基的2L三角摇瓶中，28~30℃、250~300r/min
，在超净工作台上无菌操作涂布平板，400μl/板； 将涂好的平板置于30℃正面放置至表面半干，然后倒置培养，4天后观察转化子情况4.1 菌体的准备： （1）挑取酵母单菌落，接种至含有5ml YPD培养基的50ml三角瓶中，30℃、250~300r/min培养过夜； （2）取100~500μl的培养物接种至含有500ml新鲜培养基的2L三角摇瓶中，28~30℃、250~300r/min培养过夜，至OD600达到1.3~1.5； （3）将细胞培养物于4℃，1500g离心5min，用500ml的冰
单菌落，接种至含有5ml YPD培养基的50ml三角瓶中，30℃、250~300r/min培养过夜；取100~500μl的培养物接种至含有500ml新鲜培养基的2L三角摇瓶中，28~30℃、250~300r/min培养过夜，至OD600达到1.3~1.5。（2）电击后马上加入1ml冰预冷的1mol的山梨醇溶液将菌体混匀。（3）推荐：电压1.5kV；电容25μF；电阻200Ω。电击时间为4~10msec。5、问：在下是初学者，关于毕赤酵母的诱导表达有些问题： “每24h 向培养基中添加100％甲醇
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