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文献和实验30分钟;在超净工作台上,将滤器装置装好,用灭菌无齿镊子将滤膜安放在隔板上,滤膜粗糙面向上;然后将待除菌的液体注入滤器内,开动真空泵即可过滤除菌。滤液经培养证明无菌生长后可保存备用。 五、空间采用紫外线和熏蒸灭菌 1、紫外线灭菌 在接种室、超净台上或接种箱用紫外灯灭菌。紫外线灭菌是利用辐射因子灭菌,细菌吸收紫外线后,蛋白质很核酸发生结构变化,引起细菌的染色体变异,造成死亡。紫外线的波长为200-300nm,其中260nm的杀菌能力最强,但是由于紫外线的穿透能力很弱,所以只适于空气和物体
。 (三)无菌操作的演示 1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面。 2.靠近酒精灯火焰操作。 3.器皿使用前必须过火灭菌。 4.继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。 5.各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。 三、器械的清洗和消毒 (一)玻璃器械洗消 新的玻璃器皿的洗消 1.自来水刷洗
(每遍3次),三遍三蒸水→烘箱内烘干→收入柜子→用前包装好灭菌→使用 注意:(1)烘孔板时温度不应太高,烘干后用报纸包裹,装入箱子内,照钴,便可使用。 (2) 新的培养瓶盖子泡旧5%稀盐酸1天→再用2%NaOH煮20min →自来水冲洗→洗洁精清洗→用超声清洗仪超声1遍(每遍45分钟,200C)→冲洗15遍→过三遍一蒸(每遍3次)→过三遍三蒸水→烘干使用 (二)包装与消毒 2、包装 洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装,以便于消毒
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