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文献和实验来源的组织细胞基因的差异表达,则分别提取两种组织细胞的mRNA,反转录成cDNA,分别标记两种不同颜色的荧光(如Cy3和Cy5),等量混合后与芯片进行杂交反应。杂交反应可以在专用的杂交仪(Hybridization station)或杂交盒(Hybridization chamber)内进行。杂交仪能够容纳多张芯片,有利于杂交过程的自动化和杂交条件的标准化。单个反应可以在杂交盒里进行,斯坦福大学Patrick O.Brown教授领导的实验室将制作杂交盒的详细说明提供在互联网,同时还提供了cDNA
Hybridization Chamber,旋盖式的设计和1.8ml的容积,避免了传统coverslip式杂交盒的弊端。可以单独购买。7899-1 Altas Glass Hybridization Chamber each 8016-1 GlassHyb Hybridization Solution 50ml2. Clontech ExpressHyb Hybridization Solution快速杂交液能有效加快杂交速度,减少杂交时间,同时提高灵敏度。适用于各种基于膜的核酸杂交反应,如cDNA Array
溴化乙锭(EB) 20μl, 100μl, 1000μl微量加样器及吸头,小指管 Whatman No.1滤纸及普通滤纸 10 cm×5 cm玻璃板 尼龙膜(Hybond-N+) 卫生纸(或吸水纸) 裁纸刀 杂交盒 500g重物 X光片夹及X光片 剪子、镊子、刀片、胶带 保鲜膜 一次性手套 (三)试剂 1. 20×SSC(1000 mL):3 mol/LNaCl(175.32g);0.3 mol/L柠檬
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