核酸沉淀溶液（焦磷酸钠法）

【求助】PDTC溶液的配制及灭菌发法

3200 本人最近需要使用到PDTC做一批大鼠实验，由于新手上路，请请教各位战友， PDTC该使用何种液体配制（有人说用水不易溶解）， 配制后采用何种方法灭菌（是否耐高温）？ 如何保存？不胜感激！！叩谢 3200 再次叩谢各位战友，比较急哈，可以直接讲解，也可电邮luohan_32008462@163.com.谢谢，谢谢！ haodanzhang 配制：一般用双

大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用

得到：1 A280 =1.62 mg/ml。 4. 酶活力测定     1) 氨基酸活化反应的条件如下：35ul反应液中含有100 mM HEPES (pH 7.8)，10mM KF，10 mM MgCl2 ，4 mM ATP，2 mM [32 P] PPi和1 mM亮氨酸，在37o C保温，用约4 nmol/L LeuRS起始反应，于不同时间，取出15ul反应液，加入200ul淬灭液中(3.5%高氯酸，2%活性炭和0.05 M焦磷酸钠)停止反应，在淬灭液中再加入5毫升10 mM焦磷酸钠溶液

质粒DNA的小量制备

。 ３．煮沸裂解 该法根据Holmex和Quigley(1985)的方法改进而成。 １）将细菌沉淀[收获细菌和步骤３）所得]重悬于350μlSTET中。　　STET　　0.1mol/L NaC　　10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)　　1mmol/L EDTA(pH8.0)　　5% Triton X-100 ２）加25μl新配制的溶菌酶溶液[10mg/ml,用10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)配制]，振荡３秒钟以混匀之。如果溶淮中pH低于8.0，溶菌酶就不能有效发挥作用。