内源性链亲和素封闭液

免疫组化常见十大问题与解析

不完全，若存在，需延长脱蜡时间或换用新的二甲苯。 （5）抗原修复不完全：对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合。 （6）细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应：可加入组织透化步骤，进行细胞膜或核膜的透化。 （7）试剂盒保存不当：请于 4℃ 进行保存，勿室温防止过长时间。 （8）封闭时间过长：若使用封闭液进行封闭，请排除封闭液对抗原抗体结合的影响。 Q2：免疫组化染色弱怎么办？ （1）抗体浓度过低，孵育时间过短：可提高抗体浓度，进行抗体4℃过夜孵育。 （2）组织

一文理清免疫荧光实验流程和常见问题

一抗和二抗与非特异性位点结合。通透后用PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加山羊血清，室温封闭30min。常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或者是羊血清。从封闭开始所有的步骤，一定要注意样品的保湿，避免样品的干燥，否则极易产生较高的背景。醛类固定的样品，在用一抗孵育前用含0.3M甘氨酸的封闭液进行封闭。 4. 一抗孵育 根据一抗说明书，按照适当比例用一抗稀释液稀释一抗，用吸水纸吸尽封闭液，每张玻片滴加稀释好的一抗并放入湿盒， 4℃孵育过夜。回收一抗，加入

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。5. 洗涤：切片浸没于dH2O中，3 ×5 min。去除内源性过氧化物酶6. 3% 过氧化氢处理切片，加盖室温放置15 min。（加盖的目的是为了防止过氧化氢与空气接触后并不稳定）7. 洗涤：切片浸没于dH2O中，2 ×5 min。8. 缓冲液转换：切片浸没于TBST中，1 ×5 min。封闭与一抗孵育9. 配置封闭液（Animal-Free Blocking Solution #15019），滴加在切片上，室温静置1 h。（此步建议一张张完成，防止干片）10. 配置一抗：使用SignalStain®