2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料）

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北京百奥莱博专业生产销售2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料）现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料）现货
规格：1ml/10ml
产地：国产|进口
编号：XH035
品牌：百奥莱博
产品简介：
本公司生产的PCR MasterMix中加入了高性能PCR增强剂和稳定剂，适用于常规的PCR反应。由于多种PCR增强剂和稳定剂的发现，稳定高效预配好的PCR混合液不仅简化了操作程序、减少了污染、大大降低劳动强度和取样误差，而且增加了PCR反应的特异性，降低了对PCR条件的要求，使实验结果更加精确。
该产品分为含染料和不含染料两种体系，含染料是指含有电泳指示剂（并不含核酸染料），PCR结束后可以直接电泳，但象EB之类的染料还是必须加的。
质量控制检测：
经检测无外源核酸酶活性，PCR方法检测无宿主DNA残留，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，所有产品在-20℃条件下可保存一年以上，4℃放置三个月或室温放置一周，依旧有很好的活性。

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·2×Taq PCR MasterMix(含染料）
编号：XH031
规格：1ml/10ml
产品简介：
本公司生产的PCR MasterMix中加入了高性能PCR增强剂和稳定剂，适用于常规的PCR反应。由于多种PCR增强剂和稳定剂的发现，稳定高效预配好的PCR混合液不仅简化了操作程序、减少了污染、大大降低劳动强度和取样误差，而且增加了PCR反应的特异性，降低了对PCR条件的要求，使实验结果更加精确。
该产品分为含染料和不含染料两种体系，含染料是指含有电泳指示剂（并不含核酸染料），PCR结束后可以直接电泳，但象EB之类的染料还是必须加的。
质量控制检测：
经检测无外源核酸酶活性，PCR方法检测无宿主DNA残留，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，所有产品在-20℃条件下可保存一年以上，4℃放置三个月或室温放置一周，依旧有很好的活性。

·ECL超敏发光液
编号：XH057
规格：25ml/100ml/250ml
保存条件：2－8度保存有效期12个月

产品简介
ECL化学发光液在HRP的催化下发生化学反应而发光，可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。使用照相技术（X-光胶片曝光）或者其他成像方法（如荧光或化学发光成像仪）进行检测。
我们的ECL超敏发光液是在普通的化学发光液基础之让改进而来，相对于普通发光液来说，灵敏度更高，检测下限更低，可达到pg级别的抗原，并且一抗和二抗的稀释度更高。
本产品在5分钟后光强达到最大，在30分钟时光强还能维持80%（以5分钟时光强为基础）。最终发光时长可达一小时。
操作步骤
1.在二抗孵育完毕后，将发光液从冰箱取出到室温平衡。将印迹膜充分洗涤。
2.根据需要量，将ECL超敏发光液A和ECL超敏发光液B按照1：1的比例等体积混合，配制为化学发光检测底物工作液（例如：一张8cm×6cm的膜使用2ml工作液，为节省试剂，初次实验可用洗涤缓冲液测试，以最少的液体盖住整个膜的表面）。
3.弃去洗涤缓冲液，转移到暗室或者避光盒里操作，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育5分钟。
4.去掉多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。
5.在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到荧光、化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。
6.因本产品发光发光超度高，发光时间长，所以为得到理想的结果，可多次曝光（不同时长）以得到理想的结果。
注意事项
1.为获得最佳实验结果，请务必优化实验条件，包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择，并且发光液请现用现配。
2.建议在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20（终浓度为0.05%），以减少非特异性结合。
3.由于叠氮钠是HRP抑制剂，在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。
4.免疫印迹实验进行全过程中，请确保印迹膜始终处于湿润状态，避免干燥。
5.在与膜发生接触过程中请佩戴手套或者使用洁净镊子，避免蛋白污染。
6.实验过程中，请使用洁净器材。保证非金属设备没有明显划痕，金属设备表面无锈。锈可能导致膜上带有污点或者高背景。


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·Western blotting检测试剂盒（ECL发光）
编号：XH078
规格：10T
试剂盒内容：
1. 封闭试剂：30g(可配制400ml)脱脂奶粉及其他蛋白，缓冲盐等混合物。
2. 10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3. HRP标记二抗，0.1ml，效价1：2000-5000。
4. ECL显色液，25mlA+25mlB。
试剂盒原理：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。最后经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带来（抗原所在位置）。
操作步骤：
常规电泳转膜后，
1. 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2. 按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
3. 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4. 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5. 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
6. 用稀释好的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入5ulHRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7. 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次10min。
8. 配制ECL发光液：根据用量，取ECL发光液A、ECL发光液B各等量，混匀，加在膜正面，暗室显色5分种。先倾去显色液，再小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，请小心不要错动（余下的胶片请收好）。显色30S到1分种，取出（直接上抬）胶片立即完全浸入显影液中1-2min，再丢入定影液中1分钟，离开暗室，观察结果，根据条带强弱，可再次感光一次，并且减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。
注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。而不是标本来源来洗择。因为二抗是与一抗反应而不是与标本反应。
2. western blotting ECL发光法操作比较烦琐，但其敏感性较高，对于低丰度蛋白也能显示出结果。
3.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，延长抗体孵育时间，加长感光时间。
4. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
如果实验结果无条带，可将稀释过的一抗再作1倍，10倍，50倍稀释，直接点到膜上（10ul），封闭，加二抗，最后显色，如果能显出斑点来，则证明显色系统没有问题，可从蛋白裂解和一抗上面找原因；如果无法显出，请先从显色系统寻找原因。


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·2×Pfu PCR MasterMix (含染料）
编号：XH033
规格：1ml/10ml
产品简介：
本公司生产的PCR MasterMix中加入了高性能PCR增强剂和稳定剂，适用于常规的PCR反应。由于多种PCR增强剂和稳定剂的发现，稳定高效预配好的PCR混合液不仅简化了操作程序、减少了污染、大大降低劳动强度和取样误差，而且增加了PCR反应的特异性，降低了对PCR条件的要求，使实验结果更加精确。
该产品分为含染料和不含染料两种体系，含染料是指含有电泳指示剂（并不含核酸染料），PCR结束后可以直接电泳，但象EB之类的染料还是必须加的。
质量控制检测：
经检测无外源核酸酶活性，PCR方法检测无宿主DNA残留，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，所有产品在-20℃条件下可保存一年以上，4℃放置三个月或室温放置一周，依旧有很好的活性。

·SYBR Green I(20×)定量PCR用
编号：XH027
规格：1ml
SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800—1000倍。在PCR反应体系中，加入过量SYBR Green I荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。
使用浓度对荧光PCR结果的影响
SYBR Green I荧光定量PCR的试验成功有很多因素，但是SYBR Green I的使用浓度是非常关键的因素，如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度。
我们提供的为20×的浓缩液，使用时可稀释20—100倍，即使反应的终浓度为1×到0.2×之间。
镁离子浓度的影响
提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时，镁离子浓度要比无SYBR Green I 的普通 PCR 反应要高出 0.5 到3mM。

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