PMBC

细胞内（胞浆）细胞因子的免疫学检测法

基本原理 基本原理是应用荧光素标记的特异性抗细胞因子单克隆抗体，借助FCM免疫荧光技术（如FACS）即可从单细胞水平检测不同细胞内的细胞因子，并由此可判断产生特定细胞因子的细胞种类、细胞定位，分布密度及细胞因子与组织病变的关系等。也可将细胞裂解后，应用ELISA、RIA等技术检测细胞与细胞因子水平。现以FCM免疫荧光法检测人PBMC内的细胞因子为例加以简单介绍。 操作步骤 1. 人PMBC：常规分离人PBMC，用含10%小牛血清，50μmol/L 2-巯基乙醇、1mmol/L

入坑之前需谨慎：盘点 CAR-T 实验十大雷区

人啦！Ficoll离心要慢升慢降知道吧？Ficoll对T 细胞是有一定毒性的，总量要控制哦~Ficoll吸多了还会导致PBMC洗涤困难呦~PMBC的抽提基本要求：纯度>90％，收获率>80％，活细胞率>95％，请善待每一个博士生！珍惜他们的血和泪！【第四坑】同学，你的 T 细胞贴壁了吧？在熊主任的严格管理下，汪博士常年处于亚健康状态，抽出来的 T 细胞也是萎靡不振，勉强养了三天，全贴壁了……常年研究实体瘤的熊主任和汪博士大眼瞪小眼，悬浮细胞咋就这么难养捏？老熊啊，你以为往培养基里简单加点儿 IL-2 就万事

ELISPOT的历史和展望

分之一1:1000,000的准确分析，如此强效的解析力使流式细胞技术也望其项背，以目前国内外常规的intracellular cytokine或者Dimer/ tetramer染色，流式技术的灵敏度一般限制在1:10,000。这样的高灵敏度对T细胞免疫学研究是必须的，因为抗原特定T细胞一般在机体周边循环系统发生的频率通常低于万中取一。此外由于ELISPOT Cytokine技术被证实适用于冰冻后复苏的人类淋巴球，解冻后PMBC与新鲜分离样品有相当的效价，没有丧失功能。这一点对临床试验非常重要，它使科研人员得以