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大量
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佰泰科
- 英文名:
Goat anti-FITC-BSA,serum
- 规格:
1ml
羊抗-荧光素 血清,不含任何防腐剂,请避免微生物污染。用于免疫组化,免疫比浊法,ELISA等。对荧光素双向扩散>1∶64
本品须避免反复冻融,-20℃存放。
抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。高效价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。
一种抗原能否引起抗体生成反应,一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇(Antigenic determinant),另一方面取决于机体的免疫状态,当具备以上两个条件后,抗体生成将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应。
抗原的种类繁多,包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等,不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性。一般完全抗原免疫动物需加用佐剂,尤其在使用可溶性抗原时,以期得到高效价的抗血清;合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免疫动物,方可获得理想的免疫效果。
佐剂的条件作为一种良好的佐剂,必须具备下列条件:
(1) 增加抗原的表面积,并改变抗原的活性基团构型,从而增强抗原的免疫原性;
(2) 佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间,减低抗原的分解速度,使抗原缓慢释放至淋巴系统中,持续刺激机体产生高滴度的抗体;
(3) 佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生,从而增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能;
(4) 良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。
配制方法:按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用超声波使之混匀,高压灭菌,置4℃下保存备用。
在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,制备成 “油包水”乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物,注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异,无统一标准和固定模式。一般是每兔(约2kg重)或每羊(约20kg重)第1次注射抗原1mg,以后逐次增加抗原量,最多每次不超过3mg.佐剂与抗原乳化可按如下方法进行:
(1) 研磨法:先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内,待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液,边滴边按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,继续研磨一段时间,使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。医学教育|网搜集整理本法适于制备大量的佐剂抗原,缺点是研钵壁上粘附大量乳剂,抗原损失较大。
(2) 注射器混合法:将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内,两注射器之间以一细胶管相连,注意排净空气,然后交替推动针管,直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作,抗原损失少,适用于制备少量的抗原乳剂。但同时难以乳化完全,个别抗原,用塑料注射器根本推不动,而用玻璃注射器又有渗漏。制备好的乳化剂经鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴状浮于水面,即乳化完全,为合格的油包水剂。
(3) 超声:实验室条件好点的,比如说有超声破碎仪的,一定要控制超声频率和时间,超声容易激发一些自由基,对抗原有未知损害。乳化方法要根据抗原和需要而定。
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文献和实验固定和透化 在培养板中将已爬好细胞的盖玻片用 1 × PBS 浸洗 3 次,每次 3 min。 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min,1 × PBS 浸洗玻片 3次,每次 3 min。 0.5%Triton X-100(1× PBS 配制 )室温通透细胞 15 min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤), 1 × PBS 浸洗玻片 3 次,每次 3 min。 封闭 吸水纸吸干 1 ×PBS,在玻片上滴加 5% 的正常血清(与二抗种属来源一致或相似),室温封闭 1 h
结合的标记抗原的荧光则无影响,即特异性抗体与标记抗原结合后,可以保护其荧光免受抗荧光素抗体的淬灭作用,从而达到均相反应的要求。当样品中未标记的待测抗原含量高时,竞争与特异性抗体结合,使游离的荧光素标记抗原增多,由于受到抗荧光素抗体的淬灭作用,受激发后荧光产生量反而减少,二者呈负相关,据此可以定量测定样品中待测抗原的含量。荧光保护免疫测定法(fluorescence protectionimmunoassay)可用于测定甲状腺素、人血清清蛋白、IgG等。
。 7. 光漂白 减少照明强度/时间。 选用抗荧光淬灭封片剂。 二、背景太高了怎么办? 大家在操作时可以通过设置对照,帮助我们迅速判断背景的来源。对照包括自发荧光对照(无一抗、二抗)和无一抗对照。 1. 封闭不足 选用二抗种属来源的血清封闭。 选用链霉亲和素/生物素系统,需要用链霉亲和素封闭内源的生物链酶。 选用HRP系统,需要使用过氧化氢等商业化试剂盒去活化内源性HRP。 选用AP系统,需要使用左旋咪唑等商业化试剂去活化内源
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