非变性细胞裂解缓冲液

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北京百奥莱博专业生产供应非变性细胞裂解缓冲液，我公司销售全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

规格：100ml
编号：XH065
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
非变性细胞裂解缓冲液(Nondenaturing Lysis Buffer)内含非离子型去垢剂、盐、和蛋白磷酸酶抑制剂，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。
非变性细胞裂解缓冲液的主要成分为20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% NP-40以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
关于裂解液的选择，一方面可以参考我们生产的各种裂解液主要特点、差异，选择合适的裂解液；另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
对于培养细胞样品：
1. 融解非变性蛋白裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解非变性蛋白裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P1001)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用，用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。 另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
我公司的非变性细胞裂解缓冲液，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销售下列产品：
N,N-二甲基对苯撑二胺 HBPYU 536-46-9
ARB11639 人混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)检测服务 Human mixed lineage kinase domain-like,mlkl ELISA KIT
SJ0680 Marker Ⅵ
PL0301 高纯度质粒小量快速提取试剂盒(离心柱型)
BL0623 谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P Glutathione Sepharose H.P
PY02-267 精氨酸支原体肉汤培养基基础 100克
BTN130501 柱式内毒素清除剂 Column Endotoxin Erasol
HC0260 Eppendorf连续多档加样器
J0205 兔抗辣根过氧化物酶抗血清 1ml/10ml
ARB13600 兔子补体片断3A(C3A)定量分析 Rabbit complement fragment 3a,c3a ELISA KIT
70-18-8 L-Glutathione reduced　 还原型谷胱甘肽
ARB13715 兔胎盘生长因子(PLGF)尿液中含量检测 Rabbit placenta growth factor,plgf ELISA KIT
磷酸二酯酶Ⅰ Span 80 9025-82-5
ARB10980 人免疫球蛋白重链(IgH)Elisa定量检测 Human immunoglobulin heavy chain,igh ELISA KIT
ARB13877 猪白介素4(IL-4)酶免分析 Porcine interleukin 4,IL-4 ELISA KIT
PY02-277 MUGal肉汤基础 100g，用于大肠菌群快速检验及计数
BL0825 HRP标记兔抗猴IgG抗体
N-乙酰-D-氨基葡萄糖 Pfu DNA Polymerase 7512-17-6
ARB10211 人β内酰胺酶抑制剂(BLI)酶联免疫定量检测 Human β-lactamase inhibitors,bli ELISA KIT
SJ0240 1640培养基
ARB10227 人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa分析 Human amyloid beta Peptide 1-42,aβ1-42 ELISA KIT
RN3801 "EASYspin Plus 植物RNA快速提取试剂盒
非变性细胞裂解缓冲液关键词：非变性细胞裂解缓冲液,XH065,百奥莱博
2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐 DL-Aspartic acid 30931-67-0
C1801 巴比西鼠血清(无菌过滤)
SJ0836 中低分子量标准蛋白质
4-乙基苯酚 Acid red 66 123-07-9
ARB11014 人补体调节蛋白(CCP)免费代测 Human complement control protein,ccp ELISA KIT
贝他定 Lanthanum acetate hydrate 58970-76-6
CD117 dNTP Mixture(2.5mM each)
芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺 Pronase E 82911-69-1
ARB12680 大鼠膀胱肿瘤抗原(BTA)含量测试 Rat bladder tumor antigen,bta ELISA KIT
ARB10753 人抑制素B(INH-B)elisa检测 Human inhibin b,inh-b ELISA KIT
PY02-151 0.1%蛋白胨水溶液培养基 250克
ARB13509 鱼促卵泡素(FSH)血清中含量检测 Fish fsh ELISA KIT
F030830 BIOTIN标记兔抗人IgG抗体 Rabbit Anti-Human IgG*BIOTIN
铬蓝黑R D-AAO 2538-85-4
星孢菌素 m-Dinitrobenzene 62996-74-1
ARB12660 大鼠叠氮胸苷(AZT)酶标法分析 Rat azidothymidine,azt ELISA KIT
锡酸钠 AA 12058-66-1
邻香草醛 BGP 148-53-8
53597-25-4 Protamine sulfate sale 硫酸鱼精蛋白
ARB12461 大鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)含量分析 Rat adrencocorticotropic hormone,acth ELISA KIT
DL-2-氨基丁酸 D-Gluconic acid solution 2835-81-6
PY04-012 肝浸液(牛) 100ml/瓶 根据要求适量添加，用于配制培养较难生长的微生物培养
非变性细胞裂解缓冲液关键词：非变性细胞裂解缓冲液,XH065,百奥莱博

·真菌基因组DNA提取试剂盒（非柱式）
编号：XH007
规格：50T/200T
原理简介
真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。真菌通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用液液氮研磨。经过前期处理的菌液，再经过裂解液及蛋白酶处理后，玻璃奶吸附DNA，去掉其他杂质，，可得到高纯度的基因组。提取纯化后的DNA，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。
注意事项
1．由于真菌种类万千，对于一些特别难处理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振荡，蛋白酶K处理，一般都可以得到一定量的基因组DNA，如电泳检测很弱，一般PCR都会有较好结果。
2．如果DNA提取量很少，可加长玻璃珠处理时间，如果提取DNA片段很短，成弥散条带，可减少玻璃珠处理时间。
操作步骤
1．样品的处理：
1）对于酵母菌，取1-2ml培养好的菌液，离心收集，弃上清。加入300ul 裂解液，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5-10min。
2）霉素(孢子也可相同处理)：取50-100mg菌丝，加300ul裂解液，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约30min。
3）大型真菌（如蘑菇等）：称取50-100mg样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复3 次，使样品研成粉末（如无液氮，可加300ul裂解液后用玻璃研磨器适当研磨），加300ul裂解液，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5min。
2．加入10ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，55℃水浴消化，15－30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次。
3．12000转离心2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。
4．在上清中加入三倍体积无水乙醇，充分混匀。
5．12000rpm离心5分钟，去上清，核酸在沉淀中。
6．沉淀中加入500ul结合液，55℃水浴1-2分钟，核酸沉淀可溶解。
6．玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。
7．室温放置10分钟（如果玻璃奶加量，请适当延长放置时间，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验），加入50－100ul TE缓冲液混匀溶解，55℃水浴5分钟。离心，取上清为所提基因组。
8．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。

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