动物上皮细胞培养基

动物上皮细胞培养基

上皮细胞培养基是专门为正常动物上皮细胞体外培养设计的最适于其生长的培养基。是经灭菌的液体培养基，包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质和低浓度胎牛血清(2%)。该培养基缓冲体系为重碳酸盐，在含5%CO2的细胞培养箱中平衡后pH值为7.4。该培养基的配方能够选择性的促进正常人类微血管内皮细胞体外培养中的增殖和生长，并达到最理想营养平衡状态。

动物上皮细胞培养基包含500 ml基础培养基，10mll胎牛血清（FBS, Cat. No. 0010） 、5ml动物上皮细胞生长因子（EpiCGS-a, Cat. No. 4182 ）、5 ml青霉素/链霉素溶液(P/S, Cat. No. 0503) 。细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？
动物上皮细胞培养基 原 因：
黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基
1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；
2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能
a、是“黑胶虫”，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。以前（这个至少是10年以前），很多实验室在养细胞时用国产血清，那时的血清可能质量不过关，有所谓的“黑胶虫”，但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清，即使国产的，产品里这种现象就少见了。
b、是细胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗运动。
c、是核糖体，也可能是杂质
动物上皮细胞培养基支原体污染及检测方法
（1）.支原体污染在细胞培养中最常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，最小直径0.2um，可通过滤器。
支原体在污染细胞后，它通过影响细胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长，并能降低细胞的融合率。因此，在运用各种细胞系进行实验研究时，首先要证明所用细胞有无支原体的污染。
细胞经过严格质控，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。
（2）.支原体污染后，培养基可不发生浑浊，细胞病变轻微或不明显，因此难以发现。目前，支原体检测的方法有以下几种。
（a）.相差显微镜观察；
（b）.低张处理地衣红染色法；
（c）.荧光染色法；
（d）.酶标法；
（e）.PCR法：基础医学细胞中心使用该方法进行检测。
优点：灵敏度高，检测耗时短，样品量小
（只需50ul细胞培养用液上清）。
缺点：引物及制剂费用较高。
动物上皮细胞培养基细胞特点：
1.传代情况：P2
2.活性好、稳定性高、适应性强，易培养
3.传代快、多：2-3天传一代，普通可传10代以上 肿瘤细胞无限制
4.纯度高达95% 无污染和其他杂细胞
5.有技术疑问可以提供一对一的解答：专业，及时，耐心
6.货期短，一般冻存管5-7个工作日，复苏7-15个工作日。
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动物上皮细胞培养基保藏细胞防万一
最后，通过低温保藏储备一些细胞，以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象，或常规检测呈阳性结果，那么最可靠的补救措施是扔掉所有培养物，清洁培养箱和超净台，一切从头开始。当然，你得确保储备的细胞是不含支原体的。Growth Factors and Cytokines
Mouse Growth Factors
122-03 rmGM-CSF 重组鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 "Recombinant Murine Granulocyte- Macrophage Colony Stimulating Factor
" 5μg
"123-01
" rmTNF-α 重组鼠肿瘤坏死因子-α "Recombinant Murine Tumor Necrosis Factor-alpha
" 5μg
"123-07
" rmLIF 重组鼠白血病抑制因子 "Recombinant Mouse Leukemia inhibitory factor
" 5μg
"124-02
" rmbFGF 重组鼠成纤维细胞生长因子-碱性 "Recombinant Murine Fibroblast Growth Factor-basic
" 10μg
"124-07
" rmFGF-7/KGF 重组鼠成纤维细胞生长因子-7 "Recombinant Mouse Fibroblast Growth Factor-7
" 2μg
"125-04
" rmEGF 重组鼠表皮细胞生长因子 "Recombinant Murine Epidermal Growth Factor
" 100μg
"125-06
" rmVEGF120 重组鼠血管内皮生长因子120 "Recombinant Murine Vascular Endothelial Growth Factor 120
" 2μg
"125-07
" rmVEGF165 重组鼠血管内皮生长因子165 "Recombinant Murine Vascular Endothelial Growth Factor 165
" 2μg
"128-09
" rmNOGGIN 重组鼠NOGGIN "Recombinant Murine NOGGIN
" 5μg
"221-16
" rmCXCL16 重组鼠CXCL16 "Recombinant Murine CXCL16
" 5μg