基因组DNA小量抽提试剂盒(离心柱式)

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北京百奥莱博专业生产供应基因组DNA小量抽提试剂盒(离心柱式)，我公司销售全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应基因组DNA小量抽提试剂盒(离心柱式)，产品信息：

类别：DNA纯化

英文名：Genomic DNA Mini Preparation Kit(with Spin Column)

产品名	产品编号	包装规格
基因组DNA小量抽提试剂盒(离心柱式)	YT013	50次

基因组DNA小量抽提试剂盒(离心柱式)是目前世界上最先进的基因组DNA抽提试剂盒之一。可以抽提动物组织、鼠尾、培养细胞、细菌、酵母、动物血液、昆虫以及固定组织的包括基因组DNA在内的总DNA。一个试剂盒通过说明书中提供的不同操作方法，可以抽提除植物样品外的几乎所有样品中的总DNA。

样品首先被蛋白酶K消化，随后加入适合DNA结合到纯化柱上的缓冲液，然后加入到纯化柱内。通过高速离心，使DNA在穿过纯化柱的瞬间，结合到纯化柱上，随后通过两次洗涤去除各种杂质，最后通过洗脱液把DNA洗脱下来。整个过程无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，样品裂解后仅需约15分钟即可完成。

通过本试剂盒纯化得到的基因组DNA的长度最长可达50kb左右，平均为30kb左右，最短为100bp的DNA也可以被纯化。如需获得更长的基因组DNA，对于哺乳动物样品，包括组织或细胞等，可以使用(D0061)哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒。

通过本试剂盒获得的总DNA，OD260/OD280的范围通常在1.7至1.9之间。

本试剂盒可以抽提少至数百个细胞，多至25mg组织、0.5-1cm鼠尾、500万个培养细胞、20亿个细菌或5000万个酵母。样品用量过多，反而会影响抽提效果。如果待抽提样品的DNA含量小于5ng，建议加入适当量的carrierDNA，例如poly-dT或其它对后续实验没有干扰的DNA，也可以加入适当量的carrierRNA，例如yeastRNA等，以改善抽提效果。

本试剂盒的标准操作步骤抽提得到的总DNA会含有少量RNA，但如果按照可选步骤加入RNaseA，就可以获得不含RNA的高纯度总DNA。含有RNA的总DNA可以用于PCR，但对于某些其它的后续反应可能会产生一些影响。

纯化柱对于DNA的最大容量约为30微克。通常每200万Hela细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA，每25mg肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA，每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA，每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA，每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以获得10-25微克总DNA。

本试剂盒可以抽提50个样品的总DNA。

保存条件：

蛋白酶K-20℃保存，其余均室温保存。一年有效。蛋白酶K室温(15-25℃)存放一周，活力无明显下降。

注意事项：

抽提细菌、酵母样品时还需要一些特定的试剂，详情请参考相关实验步骤。

如需制备不含RNA的高纯度总DNA，需自备RNaseA。

温度较低时样品裂解液A或样品裂解液B中可能会有沉淀产生，属正常现象。使用前必须检查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混匀后使用。

第一次使用前洗涤液I需添加7ml无水乙醇，洗涤液II需添加24ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。

本试剂盒需使用55℃水浴，请提前作好准备。

除特别说明外，每次Vortex应控制在5-10秒左右。

本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。

废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。

参考如下使用说明，从某些样品中抽提总DNA不需要使用样品裂解液A。

使用说明：

1.从动物组织中提取总DNA

a.取不超过25mg的组织(脾不超过10mg)，剪切成尽可能小的碎片，加入180微升样品裂解液A。请勿使用过多的样品，过多的样品会导致抽提效果下降。较小的组织碎片会使裂解速度加快，裂解效果提高。新鲜或冻存的组织均可，但固定过的组织请参考后续的其它步骤进行。

b.加入20微升蛋白酶K，Vortex混匀，55℃水浴孵育至完全裂解。

在孵育期间可以偶尔取出样品Vortex以加快裂解速度。裂解的时间因组织不同而有所不同，通常可在1-3小时内完成。为方便起见，可以直接裂解过夜，裂解过夜对抽提效果无任何负面影响。组织完全裂解后可以呈粘稠状，但不应该呈可把DNA纯化柱堵住的凝胶状。如果消化过夜仍呈凝胶状，说明样品用量过多，作为补救措施，可以把整个反应体系放大一倍。

c.清除RNA(可选做)。如果希望获得不含RNA的高纯度总DNA，加入4微升100mg/mlRNaseA，Vortex混匀。室温(15-25℃)放置2分钟。转录活性水平很高的组织例如肝和肾组织，RNA含量很高，在不做清除RNA的操作步骤(步骤1.c)的情况下，会导致最后获得的总DNA含有小部分RNA。如果残余的少量RNA对后续实验没有干扰，可以不进行本步实验操作，直接进入步骤d。

d.最高速剧烈Vortex15秒。加入200微升样品裂解液B，Vortex混匀。70℃孵育10分钟。加入样品裂解液B后需立即Vortex混匀。加入样品裂解液B后可能会产生白色沉淀，但大多数情况在70℃孵育后会溶解。即使70℃孵育后仍有白色沉淀也不会干扰后续实验。有些组织例如肺、脾，在加入样品裂解液B后可能会形成凝胶状物，此时需剧烈晃动或Vortex样品，以尽量破坏凝胶状物。

e.加入200微升无水乙醇，Vortex混匀。加入乙醇后必须充分混匀，否则会严重影响抽提效果。加入乙醇后可能产生白色沉淀，属正常现象，后续步骤中必须把白色沉淀和溶液全部转移到纯化柱内。

f.把步骤e中的混合物加入到DNA纯化柱内。≥6000g(约≥8000rpm)离心1分钟。倒弃废液收集管内液体。进行本步骤前需将纯化柱置于废液收集管上。倒弃废液后回收废液收集管。注意：必须把沉淀全部转移到DNA纯化柱内，否则会严重影响抽提效果！

g.加入500微升洗涤液I，≥6000g(约≥8000rpm)离心1分钟。倒弃废液收集管内液体。进行本步骤前需将纯化柱置于废液收集管上。倒弃废液后回收废液收集管。

h.加入600微升洗涤液II，≥18000g(约≥12000rpm)离心1分钟。倒弃废液收集管内液体。进行本步骤前需将纯化柱置于废液收集管上。倒弃废液后回收废液收集管。

i.再≥18000g(约≥12000rpm)离心1分钟，以去除残留的乙醇。不可把步骤h的离心时间延长而省略本步骤。倒弃废液后再离心可以确保充分去除残留的乙醇。

j.将DNA纯化柱置于一洁净的1.5ml离心管上，加入50-200微升洗脱液。室温放置1-3分钟。≥12000rpm离心1分钟。所得液体即为纯化得到的总DNA。洗脱液需要直接加至纯化柱管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。如果有必要，可以使用去离子水或TE进行洗脱。使用较小体积的洗脱液可以使获得的总DNA的浓度较高，但洗脱下来的DNA量相对较少。如果对于获得较多量的DNA非常重要，可以在第一次用200微升洗脱液洗脱后，再用200微升洗脱液重复洗脱一次。第二次洗脱可以增加产量10-80%，特别是当第一次洗脱下来的DNA大于10微克时，第二次洗脱可以获得第一次洗脱时50-80%的量。一次性加入多于200微升的洗脱液对洗脱效果的改善相对不太明显。

2.从鼠尾中抽提总DNA

a.取0.4-0.6cm的大鼠尾尖一段，或小鼠尾尖最多两段，加入180微升样品裂解液A。小鼠尾尖最长不能超过1.2cm，大鼠尾尖不能超过0.6cm。如果使用的是成年大鼠或小鼠，建议仅使用0.4-0.6cm长的尾尖。如果抽提鼠尾的DNA用于genotyping，使用0.2-0.3cm长的尾尖已经足够。

b.加入20微升蛋白酶K，Vortex混匀，55℃水浴孵育至完全裂解。在孵育期间可以偶尔取出样品Vortex以加快裂解速度。并确保鼠尾浸没在裂解液内。裂解完全通常需6-8小时。为方便起见，可以直接裂解过夜，裂解过夜对抽提效果无任何负面影响。组织完全裂解后可以呈粘稠状，但不应该呈可把DNA纯化柱堵住的凝胶状。如果消化过夜仍呈凝胶状，说明样品用量过多，作为补救措施，可以把整个反应体系放大一倍。

c.清除RNA(可选做)。如果希望获得不含RNA的高纯度总DNA，加入4微升100mg/mlRNase

A，Vortex混匀。室温(15-25℃)放置2分钟。鼠尾中RNA含量很低，但在不做清除RNA的操作步骤(步骤2.c)的情况下，会导致最后获得的总DNA含有少量的RNA。如果残余的少量RNA对后续实验没有干扰，可以不进行本步实验操作，直接进入步骤d。

d.按照等体积混合适当体积的样品裂解液B和无水乙醇，Vortex混匀。每一个样品，需混合200微升样品裂解液B和200微升无水乙醇。如果有10个样品，则需混合2ml样品裂解液B和2ml无水乙醇，以此类推。配制好的样品裂解液B和无水乙醇的等体积混合液，室温放置，3个月内有效。必须Vortex充分混匀，否则会严重影响抽提效果。

e.最高速剧烈Vortex15秒。加入400微升步骤d配制的样品裂解液B和无水乙醇等体积混合

液，剧烈Vortex混匀。加入样品裂解液B和无水乙醇的等体积混合液后可能会产生白色沉淀，属正常现象，后续步骤中必须把白色沉淀和溶液全部转移到纯化柱内，沉淀不会影响抽提效果。

f.把步骤e中的混合物加入到DNA纯化柱内。≥6000g(约≥8000rpm)离心1分钟。倒弃废液收集管内液体。

进行本步骤前需将纯化柱置于废液收集管上。倒弃废液后回收废液收集管。注意：必须把沉淀全部转移到DNA纯化柱内，否则会严重影响抽提效果！

g.加入500微升洗涤液I，≥6000g(约≥8000rpm)离心1分钟。倒弃废液收集管内液体。进行本步骤前需将纯化柱置于废液收集管上。倒弃废液后回收废液收集管。

h.加入600微升洗涤液II，≥18000g(约≥12000rpm)离心1分钟。倒弃废液收集管内液体。进行本步骤前需将纯化柱置于废液收集管上。倒弃废液后回收废液收集管。

i.再≥18000g(约≥12000rpm)离心1分钟，以去除残留的乙醇。不可把步骤h的离心时间延长而省略本步骤。倒弃废液后再离心可以确保充分去除残留的乙醇。

j.将DNA纯化柱置于一洁净的1.5ml离心管上，加入50-200微升洗脱液。室温放置1-3分钟。≥12000rpm离心1分钟。所得液体即为纯化得到的总DNA。洗脱液需要直接加至纯化柱管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。如果有必要，可以使用去离子水或TE进行洗脱。使用较小体积的洗脱液可以使获得的总DNA的浓度较高，但洗脱下来的DNA量相对较少。如果对于获得较多量的DNA非常重要，可以在第一次用200微升洗脱液洗脱后，再用200微升洗脱液重复洗脱一次。第二次洗脱可以增加产量10-80%，特别是当第一次洗脱下来的DNA大于10微克时，第二次洗脱可以获得第一次洗脱时50-80%的量。一次性加入多于200微升的洗脱液对洗脱效果的改善相对不太明显。

3.从培养的动物细胞中抽提总DNA

a.收集最多不超过500万的细胞，离心沉淀后重悬于200微升PBS中。PBS需自备。如果使用冻存的细胞沉淀，先把细胞沉淀解冻，并轻轻弹散，然后再加入PBS。对于基因组DNA含量较高的细胞，例如Hela细胞，应使用较少的细胞，例如100-200万Hela细胞。

b.清除RNA(可选做)。如果希望获得不含RNA的高纯度总DNA，加入4微升100mg/mlRNaseA，Vortex混匀。室温(15-25℃)放置2分钟。在不做清除RNA的操作步骤(步骤3.b)的情况下，会导致最后获得的总DNA含有小部分RNA。如果残余的少量RNA对后续实验没有干扰，可以不进行本步实验操作，直接进入步骤c。

c.加入20微升蛋白酶K，Vortex混匀。

d.加入200微升样品裂解液B，Vortex混匀。70℃孵育10分钟。

加入样品裂解液B后必须立即Vortex混匀。不可把蛋白酶K直接和样品裂解液B混合。

e.加入200微升无水乙醇，Vortex混匀。加入乙醇后必须充分混匀，否则会严重影响抽提效果。加入乙醇后可能会产生白色沉淀，属正常现象，后续步骤中必须把白色沉淀和溶液全部转移到纯化柱内。

f.把步骤e中的混合物加入到DNA纯化柱内。≥6000g(约≥8000rpm)离心1分钟。倒弃废液

收集管内液体。进行本步骤前需将纯化柱置于废液收集管上。倒弃废液后回收废液收集管。注意：必须把沉淀全部转移到DNA纯化柱内，否则会严重影响抽提效果！

g.加入500微升洗涤液I，≥6000g(约≥8000rpm)离心1分钟。倒弃废液收集管内液体。进行本步骤前需将纯化柱置于废液收集管上。倒弃废液后回收废液收集管。

h.加入600微升洗涤液II，≥18000g(约≥12000rpm)离心1分钟。倒弃废液收集管内液体。进行本步骤前需将纯化柱置于废液收集管上。倒弃废液后回收废液收集管。

i.再≥18000g(约≥12000rpm)离心1分钟，以去除残留的乙醇。不可把步骤h的离心时间延长而省略本步骤。倒弃废液后再离心可以确保充分去除残留的乙醇。

j.将DNA纯化柱置于一洁净的1.5ml离心管上，加入50-200微升洗脱液。室温放置1-3分钟。≥12000rpm离心1分钟。所得液体即为纯化得到的总DNA。洗脱液需要直接加至纯化柱管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。如果有必要，可以使用去离子水或TE进行洗脱。使用较小体积的洗脱液可以使获得的总DNA的浓度较高，但洗脱下来的DNA量相对较少。如果对于获得较多量的DNA非常重要，可以在第一次用200微升洗脱液洗脱后，再用200微升洗脱液重复洗脱一次。第二次洗脱可以增加产量10-80%，特别是当第一次洗脱下来的DNA大于10微克时，第二次洗脱可以获得第一次洗脱时50-80%的量。一次性加入多于200微升的洗脱液对洗脱效果的改善相对不太明显。

4.从动物血液中抽提总DNA

本操作方法也适用于血沉棕黄层(buffycoat)和骨髓(bonemarrow)的总DNA抽提。

a.取50-100微升红细胞无细胞核的血，或5-10微升活细胞有细胞核的血。人、猴、牛、兔、大鼠、小鼠等的红细胞无细胞核，鸟、鱼、蛙等的红细胞有细胞核。红细胞有细胞核会导致相同体积的血液内DNA的含量非常高。

b.加入20微升蛋白酶K。

c.加入PBS至总体积为220微升，Vortex混匀。

d.加入200微升样品裂解液B，Vortex混匀。70℃孵育10分钟。

e.转步骤3.e。后续步骤同“从培养的动物细胞中抽提总DNA”3.e起的步骤。

5.从石蜡包埋的组织样品中抽提总DNA由于包埋的组织通常已经被固定，通常仅能获得长度小于650bp的DNA。乙醇或甲醛固定的石蜡包埋组织样品相对比较适合DNA的抽提，而有交联作用的固定试剂(例如锇酸)固定的组织则不适合用于抽提DNA。需自备二甲苯。

a.取一块小于25mg的包埋块，加入1.2ml二甲苯，剧烈Vortex，以充分脱腊。

b.台式离心机最高速(12000-14000rpm)室温离心5分钟，弃上清。注意，去除上清的时候要非常小心，不要把沉淀丢失了。

c.加入1.2ml无水乙醇，轻轻Vortex混匀，以去除残留的二甲苯。

d.台式离心机最高速(12000-14000rpm)室温离心5分钟，弃上清。注意，去除上清的时候要非常小心，不要把沉淀丢失了。

e.重复步骤c和d一次，即再用乙醇洗涤样品一次。

f.弃上清后再最高速离心1分钟，用20微升枪小心吸除残留的液体。

g.室温放置数分钟至乙醇全部挥发。

h.加入180微升样品裂解液A。

i.转步骤1.b，后续步骤同“从动物组织中提取总DNA”1.b起的步骤。

6.从甲醛固定的组织中抽提总DNA

由于组织已经被固定，通常仅能获得长度小于650bp的DNA。甲醛或乙醇固定的组织样品相对比较适合DNA的抽提，而有交联作用的固定试剂(例如锇酸)固定的组织则不适合用于抽提DNA。乙醇固定的组织可以参考甲醛固定的组织的抽提方法进行总DNA的抽提。

a.取不超过25mg的组织，用PBS洗涤两次，以充分去除固定液。

b.去除PBS，转步骤1.a，后续步骤同“从动物组织中提取总DNA”1.a起的步骤。

7.从革兰氏阴性菌中抽提总DNA

a.离心收集最多不超过20亿个细菌，弃上清。

b.加入180微升样品裂解液A，充分重悬细菌。

c.转步骤1.b，后续步骤同“从动物组织中提取总DNA”1.b起的步骤。

8.从革兰氏阳性菌中抽提总DNA

需自备溶菌酶，并配制溶菌酶溶液：20mMTris，pH8.0，2mMEDTA，1.2%TritonX-100，20mg/ml溶菌酶。溶菌酶在临使用前加入。

a.离心收集最多不超过20亿个细菌，弃上清。

b.用180微升溶菌酶溶液充分重悬细菌。

c.37℃孵育30分钟以裂解细菌。

d.加入20微升蛋白酶K，Vortex混匀。

e.加入200微升样品裂解液B，Vortex混匀。不可把蛋白酶K直接加入到样品裂解液B中。

f.70℃孵育30分钟。

g.转步骤1.e，后续步骤同“从动物组织中提取总DNA”1.e起的步骤。

9.从酵母中抽提总DNA

需自备用于裂解酵母的酶lyticase，并配制酵母裂解液：1M山梨糖醇(sorbitol)，100mMEDTA，14mM2-巯基乙*(代"醇"字)。

a.离心收集最多不超过50万个酵母，弃上清。

b.用600微升上述酵母裂解液重悬，加入200Ulyticase，30℃孵育30分钟。注意：裂解的时间会随酵母的种类不同而有所不同，详细情况请参考lyticase的说明书。

c.300g离心10分钟收集沉淀，弃上清。

d.沉淀用180微升样品裂解液A重悬。

e.转步骤1.b，后续步骤同“从动物组织中提取总DNA”1.b起的步骤。

10.从昆虫中抽提总DNA

a.用液氮冷冻后研碎处理：

a1.取最多不超过50mg昆虫(例如果蝇)，液氮冷冻后研碎，转移至1.5ml离心管中。

a2.加入180微升样品裂解液A。

a3.转步骤1.b，后续步骤同“从动物组织中提取总DNA”1.b起的步骤。

b.用匀浆器匀浆处理：

b1.取最多不超过50mg昆虫(例如果蝇)。

b2.加入180微升PBS，用电动匀浆器或玻璃匀浆器匀浆。

b3.转步骤3.b，后续步骤同“从培养的动物细胞中抽提总DNA”3.b起的步骤。

11.从其它样品中抽提总DNA

对于某些样品需使用特定的裂解液裂解，可以参考如下方法进行总DNA的抽提。

a.样品用200微升特定的裂解液裂解。裂解需确保呈溶液状态，如果有不溶物需通过离心沉淀去除。

b.加入20微升蛋白酶K。

c.加入200微升样品裂解液B，立即Vortex混匀。

d.70℃孵育10分钟。检查整个溶液的pH值，确保pH值小于7.0，否则DNA结合到纯化柱的效率会很低。

e.转步骤1.e，后续步骤同“从动物组织中提取总DNA”1.e起的步骤。

基因组DNA小量抽提试剂盒(离心柱式)专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：基因组DNA小量抽提试剂盒,YT013,离心柱式

使用离心机应注意什么？

首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管，使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格 平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守，发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。

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编号	类别	名称
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YT184	细胞组织染色	红细胞裂解液
YT101	细胞及免疫学	Cy3标记驴抗山羊IgG免疫荧光染色试剂盒
YT129	细胞凋亡与增殖	细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
YT050	蛋白质研究	SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)
YT082	细胞及免疫学	柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40X)
YT273	报告基因检测	双萤光素酶报告基因检测试剂盒
YT012	DNA纯化	哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒
YT089	细胞及免疫学	免疫染色洗涤液
YT280	生化检测试剂盒	L-NMMA(总NOS抑制剂)
YT110	细胞及免疫学	Alexa Fluor 350标记的山羊抗小鼠IgG免疫荧光染色试剂盒
YT003	DNA纯化	质粒大量抽提试剂盒
YT293	生化检测试剂盒	总谷胱甘肽检测试剂盒
YT289	生化检测试剂盒	Carboxy-PTIO(一氧化氮清除剂)
YT054	蛋白质研究	非变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X)
YT104	细胞及免疫学	Alexa Fluor 488标记山羊抗兔IgG免疫荧光染色试剂盒
YT363	其他细胞生物学试剂	NF-κB激活-核转运检测试剂盒
YT026	克隆与表达	TG1甘油菌
YT169	细胞组织染色	细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒
YT237	凝胶迁移EMSA	EMSA突变探针-OCT-1(10μM)
YT163	细胞凋亡与增殖	Poly-L-lysine溶液
YT136	细胞凋亡与增殖	一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)
YT093	细胞及免疫学	Kisser封片液(phenol free)
YT099	细胞及免疫学	Cy3标记山羊抗大鼠IgG免疫荧光染色试剂盒

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