10μl（蓝色）接种环

PCR 不必“摸条件”

μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer （ 10 μM 1-5 μL 下游 Primer （ 10 μM ） 1-5 μL 模板 lamid DNA ～ 50 ng genomic DNA ～ 1000 ng cDNA ～ 500 ng 粗提液 ～ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例： 一、plasmid DNA 扩增 1．提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100，250，500

Caspase活性检测系列（分光光度法）检测原理及操作指南

。 2） 2000 rpm离心5 min，弃上清。按照每200万细胞加入50 μL裂解液的比例加入预冷的裂解液工作液，重悬细胞。冰浴裂解30 min，期间涡旋震荡3~4次，每次10 s。 B、贴壁细胞 1） 按常规方法用胰酶消化贴壁细胞，收集细胞后2000 rpm离心5 min，弃上清。PBS轻轻重悬细胞并计数。 2） 2000 rpm离心5 min，弃上清。按照每200万细胞加入50 μL裂解液的比例加入预冷的裂解液工作液，重悬细胞。冰浴裂解30 min，期间涡旋震荡3~4次，每次10 s。 C、组织

Western 实验步骤

BSA 蛋白标准液、BCA 试剂、PBS。 1) 标准曲线：用 BSA 和 PBS 混合总体积为 20 μL 的溶液做标准曲线，具体操作如下:按照 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 含量稀释 BSA 蛋白标准品，每个浓度（0、4 μL、8 μL、12 μL、16 μL、20 μLBSA，其余用 PBS 补齐至 20 μL）梯度做一个复孔。 2) 样品稀释测蛋白浓度：10 倍稀释法：取 18 μLPBS+2 μL 样品上清（经上步处理的样品 12000 r/min 离心 5 min