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- 技术资料
- 保存条件：
4℃及4℃避光
- 规格：
100T
产品名称：谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定试剂盒（比色法）
产品介绍：谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解的酶，它特异地催化还原型谷胱甘肽（GSH）对氢过氧化物的还原反应。一般认为它在细胞内能清除有害的过氧化物代谢产物，阻断脂质过氧化链锁反应，从而起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。此酶含硒，硒是GSH-PX的必要组成部分。每克分子酶含4g分子原子硒。GSH-PX的活性中心是硒半胱氨酸。测定GSH-PX活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。
包装信息：
该产品被引用文献（仅展示部分）：
1、Wang H; Chen Z; Wang M, et al., The Effect of Polyphenol Extract from Rosa Roxburghii Fruit on Plasma Metabolome and Gut Microbiota in Type 2 Diabetic Mice. Foods 2022, 11 (12), 1747.
PubMed: 35741945
2、Liu S; Meng F; Zhang D, et al., Lonicera caerulea Berry Polyphenols Extract Alleviates Exercise Fatigue in Mice by Reducing Oxidative Stress, Inflammation, Skeletal Muscle Cell Apoptosis, and by Increasing Cell Proliferation. Front Nutr 2022, 9, 853225.
PubMed: 35356725
3、Cai J; Yang J; Chen X, et al., Melatonin ameliorates trimethyltin chloride-induced cardiotoxicity: The role of nuclear xenobiotic metabolism and Keap1-Nrf2/ARE axis-mediated pyroptosis. Biofactors 2021.
PubMed: 34570919
4、Liu S; Yu J; Fu M, et al., Regulatory effects of hawthorn polyphenols on hyperglycemic, inflammatory, insulin resistance responses, and alleviation of aortic injury in type 2 diabetic rats. Food Res Int 2021, 142, 110239.
PubMed: 33773689
5、Liu S; Chang X; Yu J, et al., Cerasus humilis Cherry Polyphenol Reduces High-Fat Diet-Induced Obesity in C57BL/6 Mice by Mitigating Fat Deposition, Inflammation, and Oxidation. J Agric Food Chem 2020, 68 (15), 4424-4436.
PubMed: 32227855
操作流程：
一、试剂配制：
试剂一应用液 : 用时取0.1ml加双蒸水至10ml，现用现配，需多少配多少，4°C保存。
试剂二 : 先向甲粉试剂中加入90-100°C的热双蒸水（50T 加入85ml；100T 加入170ml），充分完全溶解。然后将
已配好的甲液与乙液充分混合。此为过饱和溶液，室温静置冷却后，如有结晶，则取上清进行实验，4°C或室温保存6个
月。
试剂三应用液：用时加双蒸水进行溶解（50T 加入100ml；100T 加入200ml），避光4°C保存6个月。
试剂四应用液：用时加双蒸水50ml进行溶解，避光4°C保存6个月。
试剂五应用液：用时每支加双蒸水10ml溶解，避光4°C可保存5天。
GSH标准品溶剂应用液：按GSH标准品溶剂贮备液：双蒸水=1 : 9 即10倍稀释配成应用液，现用现配，4°C保存。
10mmol/L GSH标准品溶液的配制：GSH的分子量为307，每次测定前将10mg的GSH标准品加入到3.25ml的
GSH标准品溶剂应用液中，混匀，现用现配。
1mmol/L标准品溶液的配制：取10mmol/L GSH标准品溶液1ml加入GSH标准品溶剂应用液9ml，现用现配。
20µmol/L GSH标准品溶液：取10mmol/L GSH标准品溶液0.02ml加入GSH标准品溶剂应用液9.98ml，现用现配。
二、样本前处理。
a. 血清（浆）：直接取原液进行检测。
b. 全血：取肝素抗凝全血20µl , 加双蒸水稀释至1ml，配成1：49的溶血液，充分混匀直至透亮为止。
c. 组织：准确称取组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1 : 9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械
匀浆，2500rpm离心10min，取上清液进行测定。
d. 细胞：将培养细胞消化，1000-1500rpm离心10min，弃上清，加0.3-0.5ml生理盐水制备成细胞悬液再进行破碎
（匀浆器匀浆、超声粉碎器或反复冻融3次进行破碎）。
e. 培养上清：悬浮细胞需1000-1500rpm离心10min，收集上清进行测定；贴壁细胞可直接吸取上清进行测定。
三、最佳取样量的参考值。
（1）血清（浆）样本：取待测血清（浆）0.1ml。
四、 酶促反应 : 以全血样本为例（试剂一应用液提前在37°C预温）
五、显色反应 :
六、计算公式：
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文献和实验PubMed: 35741945
2、Liu S; Meng F; Zhang D, et al., Lonicera caerulea Berry Polyphenols Extract Alleviates Exercise Fatigue in Mice by Reducing Oxidative Stress, Inflammation, Skeletal Muscle Cell Apoptosis, and by Increasing Cell Proliferation. Front Nutr 2022, 9, 853225.
PubMed: 35356725
3、Cai J; Yang J; Chen X, et al., Melatonin ameliorates trimethyltin chloride-induced cardiotoxicity: The role of nuclear xenobiotic metabolism and Keap1-Nrf2/ARE axis-mediated pyroptosis. Biofactors 2021.
PubMed: 34570919
4、Liu S; Yu J; Fu M, et al., Regulatory effects of hawthorn polyphenols on hyperglycemic, inflammatory, insulin resistance responses, and alleviation of aortic injury in type 2 diabetic rats. Food Res Int 2021, 142, 110239.
PubMed: 33773689
5、Liu S; Chang X; Yu J, et al., Cerasus humilis Cherry Polyphenol Reduces High-Fat Diet-Induced Obesity in C57BL/6 Mice by Mitigating Fat Deposition, Inflammation, and Oxidation. J Agric Food Chem 2020, 68 (15), 4424-4436.
PubMed: 32227855
ALT，测定肝细胞的MDA含量；同步测定96孔板中培养肝细胞的MTT反应。根据检测结果制备H2O2诱导肝细胞损伤的量效和时效曲线，选择最适损伤浓度和损伤时间制备肝细胞的损伤模型，同时设溶媒对照组，每组至少设3个复孔。4、检测指标(1)AST、ALT的测定 培养的肝细胞经离心（1 800 r·min-1，10 min）后收集上清，按试剂盒说明书步骤测定上清液中AST和(或)ALT活性，结果以U·(106 cell)-1表示。(2)肝细胞增殖试验 采用MTT比色法。(3)肝细胞谷胱甘肽过氧化物酶
蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。 2. 电泳(Electrophoresis) (1) SDS-PAGE凝胶配制 SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒。该试剂
适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。 2. 电泳(Electrophoresis) (1) SDS-PAGE凝胶配制 SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。
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