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文献和实验相关专题 LOWRY法蛋白定量专题 对许多实验来说,确定蛋白样品浓度是至关重要的。如果在2D电泳中,蛋白过多或过少,产生的后果都将是相当严重的。大多数蛋白样品可通过比色测定法定量。在典型的蛋白测定中,化学试剂加入到蛋白样品溶液里产生颜色变化,这一变化可由分光光度计或酶标仪 检测,并与已知浓度的蛋白标准曲线作比较。Bio–Rad 提供了4种蛋白测定手段,每种都有其独特的优点。 Quick Start Bradford 蛋白
致,测试后的浓度也不一致。如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质,以BSA作标准品,浓度1.34mg/ml,以a球蛋白作标准品,浓度2.64mg/ml。因此,在选择比色法之前,最好是参照要测试的样本的化学构成,寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外,比色法定量蛋白质,经常出现的问题是样品 的吸光值太低,导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是,反应后的颜色是有一定的半衰期,所以每种比色法都列出了反应测试时间,所有的样品 (包括标准样品),都必须在此时间内测试。时间过长,得到的吸光值变小,换算
扩增的效率。(3) 固相测定系统最常用的为96孔聚苯乙烯微量滴定板,可用仪器比色或读数,可用亲合素分子通过疏水相互作用包被滴定板,此固相系统可特异结合生物素或生物素化的分子可用于生物素化的PCR产物的定量,如用生物素和地高辛双重标记的扩增产物可用微量滴定板法定量,将生物素和地高辛同时标记PCR产物的方法有三种途径:①在反应混合物中同时加入地高辛和生物素标记的脱氧核苷酸类似物(DIG-/Bio-dUTP);②加入生物素化的引物1和DIG-dUTP;③加入生物素引物1和地高辛标记的引物2.定量方
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