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77
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深圳子科生物
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2000
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文献和实验是实验室中首批用于 cDNA 合成的酶之一。该酶是一种分子量为 170-kDa 的异二聚体,最佳反应温度范围为42-48℃。AMV 反转录酶具有较强的 RNase H 活性,可降解 RNA:cDNA 复合物中的 RNA,获得的 cDNA 片段较短( MMLV 反转录酶因具有单体结构而成为常用的替代品,可对重组酶进行更简单的克隆和修饰。MMLV 反转录酶是一种分子量为75 kDa 的酶,反应温度约为37°C。虽然 MMLV 的热稳定性低于 AMV 反转录酶,但其 RNase H 活性较低,因此具有
,兼备依赖于 RNA 和依赖于 DNA 的 DNA 合成活性,但降解 RNADNA 杂交体中的 RNA 的能力较弱,且对热的稳定性较 AMV 反转录酶差。 2、普通逆转录酶反应温度为 37-42 度,然而一些有丰富二级结构的复杂模板或者高 GC 含量的模板在常温下扩增困难,需要将逆转录反应置于较高温度下进行改善扩增。对于较高的反应温度,建议使用 cMASTER-RT 酶,该酶在 37-60 度的温度范围内都能保持良好的活性,使用 cMASTER-RT 酶,可以增加反应产量,还可以增加逆转录反应
Invitrogen 性能卓越的系统整合了可以利用的最好的RT技术,包括SuperScript™ III RT和最新推出的Thermo-X™ RT。SuperScript™ III RT是M-MLV RT基因工程升级版本,减少了RNaseH活性,提供更高的热稳定性(1-3)。这种酶可以在高达55℃的情况下合成cDNA,比以前使用的反转录酶提供更高的特异性,更高的cDNA产量以及更多的全长产物。Thermo-X™ RT克隆自一种嗜热真细菌,提供高达70℃的热稳定
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