604-80-8标准品异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷；异

谷类植物种子蛋白质提取

) 或 2D Quant 试剂盒（Amersham，cat.No.   80  6483 56) ，用牛血清白蛋白 ( BSA ) 作为蛋白质标准品。 2.2 特殊蛋白质的提取 1. 白蛋白和球蛋白 ( 1 ) 磷酸钠缓冲液：50 mmol/L 磷酸钠缓冲液，pH 7.8；0.1 mol/L NaCl 含有 0.4% ( V/V ) 蛋白酶抑制剂（Sigma ) 。可以在 4°C 保存 4 周。 ( 2 ) 透析：透析用 Slide-A-lyzer 透析暗盒，7 K  MWCO

【交流】RT-PCR 与 Real-time PCR

1 逆转录buffer 2μl2 上游引物 0.2μl3 下游引物 0.2μl4 dNTP 0.1μl5 逆转录酶MMLV 0.5μl6 DEPC水 5μl7 RNA模版 2μl8 总体积 10μl轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。4 梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因（β

DNA甲基化研究方法的回顾与评价

酸或氢氟酸水解成碱基，水解产物通过色谱柱，结果与标准品比较，用紫外光测定吸收峰值及其量，计算5mC/(5mC+5C)的积分面积就得到基因组整体的甲基化水平。这是一种检测DNA甲基化的标准方法。但它需要较精密的仪器。Fraga等2002年[19]运用高效毛细管电泳法(HPCE)处理DNA水解产物，以确定5mC的水平。与HPLC相比，HPCE更加简便、快速、经济。HPLC及HPCE测定基因组整体DNA甲基化水平的敏感性均较高。Oefner等1992年[20]提出变性高效液相色谱法（DHPLC）用于分析