MboI

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER0811
  • 2025年09月30日
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    16金牌会员
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    • 技术资料
    • 库存

      大量

    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : R
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - Dam甲基化可能影响DNA切割
    • - 热失活65°C, 20 min
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer R 10X Buffer Tango™
    ER0811 300 u (10 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER0811
    ER0812 1500 u (10 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER0812
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    R 37°C 50-100 50-100 50-100 100 50-100 100 1X or 2X

    Lambda DNA (dam- )
    1.4%琼脂糖
    116 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液R:
    10 mM Tris-HCl (pH 8.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM KCl, 0.1 mg/ml BSA。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    MboI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍MboI过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    备注
    • 底物为λ DNA (dam- ) (#SD0021)。
    • 重叠的Dam甲基化抑制MboI酶切。为了避免Dam甲基化的影响,样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提,如GM2163 (#M0099)。
    • MboI、Bsp143I和DpnI都识别相同的核苷酸序列,但是这些酶的甲基化敏感性和切割位置不同。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    兼容性末端
    BamHI, BclI, BglII, PsuI。

    甲基化影响
    Dam: 完全重叠 – 阻止酶切。
    Dcm: 无重叠 – 不影响。
    CpG: 可能重叠 – 不影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 可能重叠 – 阻止酶切。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dam (GATC)

    Gm6ATC

    阻止酶切
    CpG

    5'...m5C G ATm5C G ...3'
    3'... Gm5C TA Gm5C ...5'

    不阻止酶切
    EcoBI (TGA(N)8 TGCT)

    5'...TGm6ATC(N)6 TGCT...3'
    3'...AC TAG(N)6 m6ACGA...5'

    阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    116 0 7 22 15 15
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    15 15 15 15 22 15

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