荧光示踪灌注固定液

小鼠视网膜铺片及免疫荧光染色

肢抽动表明灌注固定液成功, 待抽动完全停止、全身组织器官变硬后摘取眼球，再用甲醛固定25 min。 第二步：视网膜铺片     取出眼球置于载玻片上，用吸管滴一大滴生理盐水于眼球上保证眼球完全浸没于水滴中     眼科显微镊（带齿）夹住总腱环，用显微剪沿总腱环将角膜剪下，暴露并挤出晶状体（椭球状）；除去角膜、虹膜、晶状体。     用齿镊夹住视神经，无齿镊将视网膜挤出，展开呈碗状，滴一滴生理盐水在上面，以视盘为中心, 放射状切开4刀, 呈四叶草状，去除色素颗粒, 神经层向上展平,加数滴PBS

综述：脑组织透明成像技术

观察。此种方法简单有效，脑样本浸入含有氨基醇的混合物中，通过单光子激发显微镜便可快速进行全脑成像（图 3）。经灌注固定后的组织器官按顺序浸泡到 1/2 Reagent-1、Reagent-1、1/2 Reagent-2、Reagent-2 中（表 1），37℃ 水浴，以 60 rpm 的速度轻微震荡即可透明。透明后的样品转移到 Imaging Oil 中固定 1 小时后可在光镜下观察。CUBIC 适用于成人大脑中荧光蛋白或免疫染色样品的多色成像，并且与全脑细胞核复染方案和计算图像分析管道一起，可视

免疫组化步骤

1。4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后； 2。加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5min×3； 3。加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml）30min，以增加细胞的通透性，0.01MKPBS清洗