circRNA高通量测序实验

circRNA 是通过特殊的选择性剪切产生封闭环状结构的非编码RNA。 circRNA不受RNA外切酶的影响，比线性RNA表达更稳定。研究表明，某些特殊的 circRNA 分子富含 miRNA结合位点，在细胞中起到miRNA sponges的作用，进而解除 miRNA 对其靶基因的抑制作用。ciRS-7(CDR1a)包含 63 个保守的 miR-7结合位点，该 circRNA 在细胞中能够有效吸附miR-7。而miR-7 作为关键调节因子广泛参与癌症途径，如抑制在乳腺癌、胶质瘤等癌症中表达显著上调的Pak1的表达；miR-7 也能通过结合α-synuclein抑制其表达。这些研究暗示ciRS-7 通过ceRNA 机制调节miR-7的功能，是神经系统疾病和癌症治疗的潜在靶点。

图1 cirRNA转录过程 图2 ciRs-7作用机制
目前对circular RNA的研究还不多，特别是对这类RNA的生物学功能研究还有待挖掘。 通过高通量测序技术寻找反向剪接的reads，即back-splicing reads，可以检测样本中circRNA表达及其发现样本中新的circRNA。

图3 cirRNA测序实验流程
数据分析：
1、基础分析
测序数据评估及预处理
基因组比对
circRNA预测
circRNA注释
circRNA表达定量
circRNA差异表达分析
2、高级分析
circRNA关联基因的GO富集分析
circRNA关联基因的KEGG富集分析
circRNA-miRNA靶向预测
circRNA-miRNA-mRNA ceRNA分析