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文献和实验室使用。市场上有一些专供HRM分析的仪器,不过,那些带有HRM功能的定量PCR仪则更实用。QIAGEN的Rotor-Gene Q(Corbett Rotor-Gene 6000)就是全球第一台将实时扩增与HRM分析技术相结合的实时荧光定量分析装置。Rotor-Gene Q的温度均一性为0.01°C,温度分辨率为0.02°C,解决了温度均一性、精确性和分辨率的问题,实现了定量扩增与HRM的合二为一。
半定量做结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(Combined Bisulfite Restriction Analysis,COBRA)也可 需要PCR技术和凝胶电泳分析。 haohao962 HRM对机器的要求较高,比如用QIAGEN的Rotor-Gene Q(Corbett Rotor-Gene 6000)。配合饱和染料有LC Green,LC Green Plus,SYTO 9和Eva Green。 有了仪器方法不难,难在内参质控的制作
【资源】一种被广泛用于实时定量 PCR 的绿色荧光 DNA 染料
)。所有反应均以复管形式使用相同的循环条件(95 ℃ 15 秒,60 ℃ 60 秒)在 ABI 7900 上完成。 高分辨率溶解曲线分析(HRM)图 2 . 在 Rotor Gene 6000 上使用 EvaGreen 进行高分辨率熔解曲线( HRM )分析可以明显的区分三个不同的基因型:突变型(红色)、杂合型(紫色)和野生型(蓝色)。(数据由 Corbett Research 提供)特 性:极高的灵敏度在推荐浓度下使用时可以获得最强的 PCR 扩增信号PCR 抑制性极小智能化的“按要求释放”DNA
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