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- QIGEN
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- 2026年01月03日
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QIGEN
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文献和实验A Modified Protocol for Bisulfite Genomic Sequencing of Difficult Samples
: methylation-specific PCR (3 ), combined bisulfite restriction enzyme analysis (4 ), methylation-sensitive single nucleotide primer extension (5 ), methylation-sensitive single-strand conformation analysis (6 ), MethyLight (7 ), oligonucleotide microarray
和PCR引物来区分甲基化和未甲基化的DNA。首先用亚硫酸氢盐处理DNA片段，并设计一个能与待测位点互补的探针，随后开展实时定量PCR。这种方法最大的优势在于其高通量和高敏感性，且无需在PCR后电泳、杂交等操作，减少了污染和操作误差。 Qiagen就提供了多种预制的MethyLight分析。EpiTect MethyLight PCR Kit包括了两条甲基化敏感的TaqMan探针和2条甲基化不敏感的PCR引物。随着目标序列甲基化状态的不同，只有FAM标记的亚硫酸氢盐转化的甲基化DNA特异
. The protocol includes steps arrangedin order of actual experiments: selection of targets and cloning oftargeting constructs (Subheading 3.1 ), delivery into mammaliancells (Subheading 3.2 ), assay for genomic cleavage (Subheading 3.3 ),implementation
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