凝血酶来源于牛血浆

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凝血酶来源于牛血浆

产品名称	凝血酶	级别	超纯、高纯	产品规格	500U-50ku
CAS	9002-04-4
用途范围	科学研究

产品介绍：

凝血酶（Thrombin）来源于牛血浆，分子量37KD，是由两条肽链（31KD和6KD）通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原（凝血因子Ⅱ）激活后形成的蛋白质水解酶，其催化纤维蛋白原（Fibrinogen）水解掉A肽和B肽，由此形成纤维蛋白单体，单体进一步聚合，在血小板、红细胞和白细胞等参与下形成血凝块。

使用说明：

（一）融合蛋白切割

由于凝血酶具有切割序列专一性强，水解效率高的特点，它被广泛地应用于基因工程产品的开发，其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂，尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。

凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶，能够有效切割质量比仅为1:2000的蛋白。切割可在20℃到37℃之间切割0.3到16小时。凝血酶较合适的切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',这里X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸，一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和MY-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他识别位点是 X2-R[K]-X1', 这里X2 或者 X1'是甘氨酸，例如A-R-G和G-K-A，这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和N末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切，通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。有效的消化缓冲液是20mM Tris-HCl缓冲液,含150mM氯化钠,pH8.0。凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。

（二）血小板聚集试验

凝血酶与血小板表面的凝血酶受体结合，活化血小板，使血小板粘附和聚集。

血小板聚集实验参照文献：兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol／L柠檬酸钠，111 mmol／L葡萄糖，53 mmol／L柠檬酸)0.15体积比抗凝，200 g离心10 min，离心2次，取上清，800g离心15 min。沉淀中加Tyrode—Hepes缓冲液(140 mmol／L NaCl，5 mmol／L KCl，1 mmol／L MgCl₂，10 mmol／L Hepes，10mmol／L葡萄糖，pH 7.4)调节至血小板数为(3～4)×10¹¹／L。血小板聚集用血液凝集仪来测定。血小板悬液(0.2ml )与药物温育1 min，然后用凝血酶(500 u／L)作用5 min，记录聚集情况。

产品特点：

1、纯度：SDS-PAGE检测图谱无杂蛋白条带；

2、比活：比活力大于2000单位/mgpr；

3、不含有其他蛋白酶活性；

4、产品稳定性好：冻干产品在室温条件下考察12个月，酶活力未见显著变化，冷藏条件下保存36个月，酶活力未见显著变化。

SDS-PAGE图谱：泳道1为自制凝血酶（非还原），泳道2为进口凝血酶（非还原）；泳道3为自制凝血酶（还原），泳道4为进口公司凝血酶（还原)