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凝血酶来源于牛血浆
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牛来源,比活2000U/mg
参考说明书
Thrombin from bovine plasma
大量
上海羽哚生物
9002-04-4
50KU
产品介绍:
凝血酶(Thrombin)来源于牛血浆,分子量37KD,是由两条肽链(31KD和6KD)通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原(凝血因子Ⅱ)激活后形成的蛋白质水解酶,其催化纤维蛋白原(Fibrinogen)水解掉A肽和B肽,由此形成纤维蛋白单体,单体进一步聚合,在血小板、红细胞和白细胞等参与下形成血凝块。
使用说明:
(一)融合蛋白切割
由于凝血酶具有切割序列专一性强,水解效率高的特点,它被广泛地应用于基因工程产品的开发,其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂,尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。
凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶,能够有效切割质量比仅为1:2000的蛋白。切割可在20℃到37℃之间切割0.3到16小时。凝血酶较合适的切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',这里X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸,一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和MY-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他识别位点是 X2-R[K]-X1', 这里X2 或者 X1'是甘氨酸,例如A-R-G和G-K-A,这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和N末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切,通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。有效的消化缓冲液是20mM Tris-HCl缓冲液,含150mM氯化钠,pH8.0。凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。
(二)血小板聚集试验
凝血酶与血小板表面的凝血酶受体结合,活化血小板,使血小板粘附和聚集。
血小板聚集实验参照文献:兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol/L柠檬酸钠,111 mmol/L葡萄糖,53 mmol/L柠檬酸)0.15体积比抗凝,200 g离心10 min,离心2次,取上清,800g离心15 min。沉淀中加Tyrode—Hepes缓冲液(140 mmol/L NaCl,5 mmol/L KCl,1 mmol/L MgCl2,10 mmol/L Hepes,10mmol/L葡萄糖,pH 7.4)调节至血小板数为(3~4)×1011/L。血小板聚集用血液凝集仪来测定。血小板悬液(0.2ml )与药物温育1 min,然后用凝血酶(500 u/L)作用5 min,记录聚集情况。
产品特点:
1、纯度:SDS-PAGE检测图谱无杂蛋白条带;
2、比活:比活力大于2000单位/mgpr;
3、不含有其他蛋白酶活性;
4、产品稳定性好:冻干产品在室温条件下考察12个月,酶活力未见显著变化,冷藏条件下保存36个月,酶活力未见显著变化。SDS-PAGE图谱:泳道1为自制凝血酶(非还原),泳道2为进口凝血酶(非还原);泳道3为自制凝血酶(还原),泳道4为进口公司凝血酶(还原)
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