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840-208100
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文献和实验, 100 mM NaCl,0.5% Triton X-100,调pH值至8.5-9.0备用;用前加入100 μg/ml 溶菌酶,1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。 2、将40ml 菌液在12000g,4℃下离心15分钟收集菌体,沉淀用PBS 悬浮洗涤2遍,沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。 3、超声粉碎,采用300w,10s超声/10s间隔,超声20min,反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
蛋白质组学分析方法样品处理:收集晨起清洁中段尿100ml,2h内4摄氏度1500r/min离心15min,收集上清液,弃去细胞碎片和核,上清液在血细胞计数板观察无细胞或颗粒,去上清液与-20摄氏度预冷纯丙酮1:1混匀,4摄氏度静置15min,12000r/min离心5min,弃上清,将沉淀溶于样品裂解液中,超声10Hz/10s冷却50s重复6次,4摄氏度12000r/min离心10min,去上清,过除盐柱除盐,蛋白质干粉溶于裂解液中,检测总蛋白浓度。分装,-80摄氏度冻存备用。酶切和同位素标记:将蛋白溶液用DTT
1:10000,室温孵育 40min。洗膜:TBST洗膜3次,每次10min。 (9) ECL滴加到膜的蛋白面,反应3min;胶片曝光:10s-5min(曝光时间随不同光强度而调整),显影2min,定影。 四、实验结果 1:检测条带见JPG和PPT文件。 2:数据分析(图片扫描后,并使用软件为:Gel Image ststem ver.4.00(tanon,china) 对图像进行灰度分析 3:出具实验报告 实验全程客观准确、结果真实,最大限度减少人为误差干扰,还原实验本真
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