- ¥300
- 柏奥易杰EASYBIO
- 中国
- BE6032
- 2026年01月09日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
4888
- 供应商：
EASYBIO
- 现货状态：
现货
- 保修期：
/
- 规格：
8*10英寸
压片暗盒
压片暗盒 8*10
产品货号：BE6032
应用范围：WB曝光
产品描述：用于Western Blot实验中，抗体膜曝光
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文献和实验加入：Labeling 5× buffer 10 μl（含有随机引物）dNTPmix 2 μl(含 dCTP、dGTP、dTTP 各 0.5 mM)BSA（小牛血清白蛋白）2 μl[ a -32 P]dATP 3μlKlenow 酶 5 U3. 将变性模板 DNA 加入到上管中，加 ddH2O 至 50 μl，混匀。室温或 37 ℃ 1 hr。4. 加 50 μl 终止缓冲液终止反应。标记后的探针可以直接使用或过柱纯化后使用。由于 a -32 P 的半衰期只有 14 天，所以标记好的探针应尽快使用。探针的比活性最好
饱和的滤纸（Whatman 3MM），平台两端的滤纸应浸入缓冲液中，用10ml的玻璃吸管滚动以赶除气泡并将滤纸推平。 3．在滤纸表面倒入数ml 20×SSC，将凝胶倒扣于滤纸上，小心赶除凝胶与滤纸间的气泡，凝胶四周用胶布粘贴或用塑料薄膜包裹以防缓冲液直接从凝胶周围流至纸中（虹吸短路）。 4．用数ml 20×SSC浸没凝胶，置滤膜于凝胶上，确保凝胶与滤膜之间无气泡。用软铅笔标记面对凝胶的滤膜面。 5．滤膜表面放三张大小与滤膜相似并预先用20×
透射仪3～5min。 20． 这时的滤膜已可用于杂交，或贮存在4℃。硝酸纤维素膜需真空保存，尼龙膜需用塑料薄膜密封。 二、DNA印迹杂交 1．用5×SSPE浸渗DNA滤膜。 2．将浸湿的DNA滤膜放入塑料袋内，袋的四边密封并剪去一角。 3．从缺口处加入预杂交液（0.1ml/cm2），避免加入气泡，将袋中的气泡全部挤出，封口。 4．将塑料袋置水浴摇床中温育，或夹在两块玻璃板中置65℃烤箱2～4小时，确保滤膜表面无气泡。 5．在95℃ 10min使探针变性，立即置冰浴冷却5min
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