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- 2025年11月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant Toll Interacting Protein (TOLLIP)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg
www.shklbio.com
应用重组DNA将目标基因进行表达得到的蛋白质成为重组蛋白，重组蛋白在生物信号传导过程，药物研发，科学研究中扮演着重要角色。下面来介绍一下重组蛋白的生产工艺流程。
1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验酵母菌，实际上是一些单细胞真菌的统称，在自然界中分布广泛。其中有很多种属已被成功用于外源基因的表达和研究。它不仅集合了原核表达系统培养方便、经济实用、易于大规模发酵等优点，而且还具备真核表达系统蛋白翻译后修饰的功能。今天AtaGenix这位老司机将带你熟悉我们拥有的酿酒酵母和毕赤酵母两套蛋白表达系统，让你在重组蛋白的道路上越走越远。 1 酿酒酵母 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），在传统工艺中是面包师和酿酒
- 有活性的蛋白：昆虫细胞提供较好的蛋白正确折叠和修饰系统 - 蛋白复合物：多个蛋白共表达，表达和纯化制备蛋白复合体 - 易于放大 - 时间：最快可以二个月内得到需要的蛋白 - 最优流程：细胞生长，蛋白表达和纯化工艺流程 - （可选）蛋白活性检测服务 原核表达系统 –大肠杆菌表达平台 - 物廉价美的重组蛋白表达平台 - 丰富的可溶性表达经验 - 周期快：最快3周就能得到目的蛋白 - 稳定的实验流程 2. 蛋白相互作用研究平台
1. 前言 蛋白质芯片包含几百甚至几千个已知的蛋白样品，这些蛋白样品有序、高密度排列在镀膜玻璃板上。利用这些蛋白质芯片可以对蛋白质的表达 [5~7] 和修饰 [ 8~ 11] 进行平行、快速和简易的分析，同时也可以用来检测这些蛋白质与抗体、其他蛋白 [ 16，17] 、DNA [ 18，19 ] 或其他小分子 [ 20，21 ] 之间的相互作用。已有一些研究工作使用蛋白质抗原芯片分析特异性抗体 [ 12，15 ] 或从患有不同疾病的病人中筛选血清 [ 15，22，23 ] 。蛋白质组芯片
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