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Mycoplasma elimination reagent
经过强生、礼来、阿斯利康、恒瑞、药明康德、复旦大学等多家单位试用,反应良好,请放心使用。
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支原体清除剂
本产品用于清除细胞培养中出现的支原体污染,不用于人体。
保存条件:室温下一周,4℃一个月,-20℃两年。如需保存在-20℃,请分装以避免反复冻融。如发现有结晶出现,涡旋振荡使其溶解即可。
支原体污染是基础研究和工业生产中一个很常见的问题,可能有高达87%的细胞系发生过支原体污染。支原体是一种直径约为0.2~0.3 um,无细胞壁的原核生物,具有变形能力,可透过常见过滤膜(0.22-0.45 um),常规的无菌过滤方法不能将其去除,细胞培养常用的青霉素和链霉素也不能清除培养物中的支原体。支原体污染能改变细胞的DNA、RNA和蛋白质的合成,引起染色体异常,尤其是会改变宿主细胞表面膜蛋白抗原性。
由于支原体污染能影响几乎每一个细胞参数,所以很多研究都强调常规筛选研究细胞系的需要,以确保观察到的结果不被污染所损害。
本产品属于新一代杀菌抗生素,可用于细胞培养中支原体污染的预防和清除。同时能以较低的浓度发挥广谱的抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的作用,譬如能作用于耐青霉素与链霉素的细菌,已证实其对真核细胞无毒性。
本产品包括两种杀菌成份,即大环内脂类和喹诺酮类物质。大环内酯能结合细菌50S核糖体亚基,从而抑制蛋白质合成,喹诺酮则抑制细菌DNA消旋酶的活性。因此可以在细菌DNA复制及蛋白质合成两个层面上抑制细菌生长,明显增强除菌效果。这两个靶点在真核细胞内都不存在,所以本产品对真核细胞无毒。将本产品作用浓度加高5倍,对细胞没有明显的影响。在更高的浓度下,细胞的生长速率会出现下降,这是由于线粒体呼吸受到抑制的缘故,去除本产品后细胞生长速度即可恢复正常。
由于优越的双重除菌机制,本产品可避免抗性支原体的产生。
喹诺酮可以自由的穿透哺乳动物细胞,可以同时除去游离形式的及真核细胞内部的支原体,这个特点保证了经过处理的细胞不会被支原体感染细胞中释放出的支原体反复感染。因此可以避免除菌后细胞内支原体的反复感染。
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文献和实验网友eming43的经验 支原体的检测. PCR法 原理 该法是通过PCR技术将支原体16srRNA基因特异性扩增,来检测培养细胞中污染的支原体。PCR引物选自16sr RNA基因上的支原体特异片段,此片段与其他细菌的序列无交叉性杂交反应。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳,经溴乙啶(EB)染色后在紫外透射仪上进行检测。 u 16sr DNA引物用水稀释至40umol/L。 (1).正向引物:5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTA-3’ (2).反向
污染测试--支原体 : PCR方法原理: 利用具特殊专一性之primers,经由PCR反应来复制mycoplasma DNA。所用之primers来自mycoplasma之conserved 16S-23S rRNA序列,由于此段spacer之序列依mycoplsma种类不同而不同,因此可依所复制之DNA大小及其restriction fragment大小差异来作侦测与鉴定。 特点:灵敏(e.g. 0.1~1.6 CFU / 5 ul sample) 与快速(一天)。可侦测不易培养
最近看大家常提到支原体污染,就翻了翻书,做了些笔记,现在贴出来和大家分享: 支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2um)并独立生活的微生物。约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性。可为圆形、丝状或梨形。 支原体形态多变,在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构。其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似,但微绒毛电子密度比支原体小,且中央无颗粒群或中央束。 支原体代谢需固醇
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