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- KALANG/进口品牌
- 中国/美国
- KL050Hu61
- 2025年11月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg
www.shklbio.com
1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验的物理性嗅觉干预即可显著抑制同侧嗅球中肿瘤的发生与发展。综上，利用化学遗传学以及物理方法，研究团队充分证明了嗅觉感知可以调控胶质瘤的发生。 利用硅胶塞剥夺小鼠嗅觉可以抑制嗅球中胶质瘤 接下来，研究团队对嗅觉调控胶质瘤发生的分子机制进行了探究。 通过对单侧嗅觉剥夺小鼠的两侧嗅球组织进行转录组测序，筛选出了潜在效应因子- 胰岛素样生长因子 1（IGF1）。 有趣的是，团队之前发表的工作已经证明了前癌细胞表达的 IGF1 受体（IGF1R）对胶质瘤发生发展具有重要作用，支持对 IGF1
症综合征的遗传热点。由于WAPCre系统，这种点突变只在小鼠的乳腺中活跃，通过这种突变，该菌株将在1岁左右自发地发展出与人类相关的乳腺肿瘤。我们经常让这些小鼠模型接触胰岛素样分子。频繁注射两种模型化合物AspB10和胰岛素样生长因子-1（IGF1）后，大鼠乳腺肿瘤的表达明显降低。AspB10，又称X10，是一种早期胰岛素类似物，由于增强了IGF1R结合亲和力，具有很强的启动细胞分裂的潜力。IGF1是IGF1R的天然配体，这种受体在细胞分裂信号中起着重要作用。与常规胰岛素相比，甘精胰岛素在体外实验中
的点突变而得名;一种与人类李弗罗梅尼癌症综合征基因热点相对应的基因。由于WAPCre系统，该位点突变只在小鼠乳腺中活跃，在1岁左右，该菌株会自发地发展为人类相关乳腺肿瘤。我们经常将这些小鼠模型暴露在类胰岛素分子中。频繁注射两种模型化合物AspB10和胰岛素样生长因子-1 (IGF1)后，肿瘤表达明显下降，这两种模型化合物均与大鼠乳腺肿瘤相关。AspB10，也被称为X10，是一种早期的胰岛素类似物，由于增强了IGF1R的结合亲和力，具有启动细胞分裂的强大潜力。IGF1是IGF1R的天然配体，该受体在细胞
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