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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
见说明书
- 亚型:
见说明书
- 形态:
粉末/液体
- 保存条件:
-20oC 至 -80oC
- 克隆性:
Polyclonal
- 标记物:
未标记
- 适应物种:
Mus musculus (Mouse)
- 宿主:
Rabbit,兔
- 应用范围:
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度:
200ug/ml
- 靶点:
见说明书
- 抗体英文名:
Polyclonal Antibody to Octamer Binding Transcription Factor 4 (OCT4)
- 抗体名:
八聚体结合转录因子4(OCT4)多克隆抗体
- 规格:
100ug/200ug/100ug/200ug
| 规格: | 100ug/200ug | 产品价格: | ¥780.0-¥2850.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100ug/200ug | 产品价格: | ¥650.0-¥1800.0 |
www.klbscience.com
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异,种系相近会影响免疫效果,一般要求动物适龄,健康,体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml, 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放,增加免疫效果,常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间,小动物一般间隔10~14天,大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后,进行抗血清效价测定,当效价达到理想状态时,便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血,静置待血液凝固成血块收缩析出血清,3000rpm离心15 min,取上清。这个过程要注意动物的养护,耗时长,但得率低,得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点,在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。
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文献和实验比较常见的。在不同的细胞环境下,某个转录因子经历不同的修饰(如磷酸化和去磷酸化,或者通过与其它蛋白的结合),可获得不同的转录活性。在真核细胞中,抑制或激活难以由单一蛋白来实现,通常依靠“团队”复合体来完成。 但是难于理解的地方在于:在同样的胞内环境中,同样的转录因子(如上面提到的Oct4)行使了相反的功能。如下图。 个人想到的解释是: 1: 转录因子与DNA序列的结合改变了自身构象,从而改变了其对沉默或激活复合物的亲和力; 2: 与其它转录因子的协同作用决定是激活
四因子作用那么,是否可以直接应用相关转录因子对体细胞进行重编程而逆转终未分化细胞的发育潜能, 进而表现出ES细胞那样的多潜能性呢?Takahashi和Yamanaka{4}选择24种在小鼠早期胚胎ES细胞或者肿瘤细胞中丰富表达的转录因子, 通过筛选、组合, 发现用Oct4, Sox2, c-Myc和Klf4 4个因子(这4个因子也被称为Yamanaka因子)可以有效地将胎鼠成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast, MEF细胞)和小鼠尾尖成纤维细胞诱导形成形态和生长
是因为其高稳态表达水平是通过转录本高稳定性的积累来实现的。 在ESCs中,多能状态主要由少量增强子相关的主要转录因子控制,包括Oct4、Sox2和Nanog,它们驱动维持ESC状态所必需的靶基因的表达。结果显示,在s4U-标记实验中,Oct4、Sox2和Nanog (OSN) 调控的靶基因在T > C reads中有很高的水平(图5b)。从全局来看,与4,994个近端不含OSN增强子的基因相比,含OSN增强子的2029个基因(>5 cpm)的转录本产生的 T> Creads显著增高 (Mann–
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