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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
见说明书
- 亚型:
见说明书
- 形态:
粉末/液体
- 保存条件:
-20oC 至 -80oC
- 克隆性:
Polyclonal
- 标记物:
未标记
- 适应物种:
Homo sapiens (Human)
- 宿主:
Rabbit,兔
- 应用范围:
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度:
200ug/ml
- 靶点:
见说明书
- 抗体英文名:
Polyclonal Antibody to Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor (a1M)
- 抗体名:
α1-微球蛋白(α1M)多克隆抗体
- 规格:
100ug/200ug/100ug/200ug
| 规格: | 100ug/200ug | 产品价格: | ¥1.0-¥1980.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100ug/200ug | 产品价格: | ¥1.0-¥1980.0 |
www.klbscience.com
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异,种系相近会影响免疫效果,一般要求动物适龄,健康,体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml, 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放,增加免疫效果,常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间,小动物一般间隔10~14天,大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后,进行抗血清效价测定,当效价达到理想状态时,便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血,静置待血液凝固成血块收缩析出血清,3000rpm离心15 min,取上清。这个过程要注意动物的养护,耗时长,但得率低,得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点,在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。
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文献和实验;加入羊抗人α2M多克隆抗体,37~C 2h,洗涤;加入HRP标记的兔抗羊IsC,孵育后加入底物呈色。终止反应后在酶标仪上读取492nm波长的吸光度值。按常规绘制标准曲线,算出待测血a2M含量。 3.正常值范围与临床意义 免疫扩散法测得正常男性血清a2M为1.5~3.5z/L,女性为1.35~4.2g/L。2—4岁儿童血清a2M约为成人的2~3倍。更年期妇女血清e2M含量也较高。ELBA法检测正常人尿液中Q,M含量均低于0.026mg/L
将PBS或生理盐水的pH调至偏酸(5.0)或偏碱(8.5)作为洗涤液,用10倍柱体积洗柱一次,也可以直接用150mM Gly,基本不用调pH就是pH=5.0了。另一种体系是高盐离子浓度,例如可以在PBS里加入NaCl至终浓度为1M,10倍柱体积洗涤一次。两种体系的本质都是减弱蛋白质分子间的作用力。 7. 洗脱 经过第6步的操作后,结合在柱上的抗体就非常纯了,同时那些亲和力弱的抗体也被洗掉,于是可以开始洗脱了。洗脱方法和上面的洗涤原理基本类似,只是条件更苛刻一点。通常用得比较
源途径和产生 Aβ的淀粉源途径,在第一条水解途径中,APP 的蛋白水解及分泌需经过α-分泌酶作用,产生可溶性α-APPs 并释放到胞外,同时留下 APP 的α-CTF 或 C83(C-terminal fragment,CTF),C83 能被γ-分泌酶进一步剪切,产生 APP 胞内端 AICD 和不会聚集的 p3 肽段 [3]。因这一过程破坏了 Aβ的完整结构,无神经毒性,该过程称为非淀粉样蛋白生成途径,在正常情况下,该代谢途径占优势。 Aβ是经由淀粉样蛋白途径生成
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