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- KALANG/进口品牌
- 中国/美国
- KL856Ra01
- 2026年01月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant Smoothelin (SMTN)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg
www.shklbio.com
1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验这是我以前翻译的一外文综述，外文现在找不到了，拿出来大家看看，是否有用 “抗肿瘤特异性抗原预防接种方法的设计和评价” 抗肿瘤特异性抗原预防接种方法的设计和评价 我们通过对临床前期小鼠模型的研究，对癌症患者应用肿瘤特异性接种的效果和安全性做出评价。第一批临床实验显示接种的方法是安全的，然而临床应答特别是由疫苗引起的免疫应答仍然缺乏。实际上很多实验到目前为止完成晚期癌症患者的很少，患者期待着抗肿瘤疫苗 的巨大功效。另外在自然和疫苗导致的T细胞免疫方面的研究还有待更大的改进
重组蛋白A在免疫试剂应用中的新进展广州精达公司-美国免疫学博士 胡勇摘要 抗体是免疫诊断试剂领域最重要的原料，蛋白A是纯化抗体最有效的工具，广泛用于免疫诊断试剂的许多领域。重组蛋白A具有产量大，成本低，纯度高，特异性好的优点。重组蛋白A的国产化将极大促进免疫诊断试剂的产品开发和市场效益。 关键词 抗体纯化 免疫诊断试剂 重组蛋白A 国产化蛋白A（Protein A）为金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白，具有与人类和哺乳动物血液中免疫球蛋白IgG分子的Fc段特异性结合
纯化最常用的方法之一，是亲和层析法，借助标签和配体的亲和力进行蛋白纯化。纯化的重组蛋白通常能以特异性的方式被洗脱，例如，在 Strep 标签蛋白纯化中，加入生物素(biotin)即可断开 Strep 标签与配体 Strep - Tactin 的作用，达到有效洗脱的目的。得到高纯度有活性的蛋白质应用在多种下游实验中，如研究蛋白质间相互作用等。 那么是否可以以此为基础，将标签配体亲和力加以利用，结合免疫识别特性，用温和的方法得到高纯度的目的细胞呢？ 一、「画龙点睛」的表位标签—— Fab
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