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- KALANG/进口品牌
- 中国/美国
- kl787Rb52
- 2025年07月12日
- WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- Rabbit，兔
- Rattus norvegicus (Rat)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原：
见说明书
- 亚型：
见说明书
- 形态：
粉末/液体
- 保存条件：
-20℃至 -80℃
- 克隆性：
Polyclonal
- 标记物：
未标记
- 适应物种：
Rattus norvegicus (Rat)
- 宿主：
Rabbit，兔
- 应用范围：
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度：
200ug/ml
- 靶点：
见说明书
- 抗体英文名：
Polyclonal Antibody to Annexin A4 (ANXA4)
- 抗体名：
膜联蛋白A4(ANXA4)多克隆抗体
- 规格：
100ug/200ug
www.klbscience.com
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白，通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白，纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原，常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异，种系相近会影响免疫效果，一般要求动物适龄，健康，体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等，大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml， 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放，增加免疫效果，常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间，小动物一般间隔10~14天，大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后，进行抗血清效价测定，当效价达到理想状态时，便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血，家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血，家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血，静置待血液凝固成血块收缩析出血清，3000rpm离心15 min，取上清。这个过程要注意动物的养护，耗时长，但得率低，得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化，利用偶联了抗原的亲和柱进行层析，具有高效，特异性强，纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价，而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点，在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。
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文献和实验腹水。刚采出的腹水含有大量的油脂、巨噬细胞、杂交瘤细胞、腹腔内的上皮细胞、血液中的细胞成份等杂质，尤其是这些细胞成份，如果不除去则可能在腹水的长期保存中慢慢破裂，细胞内的蛋白质成份会释放到腹水中，增加了腹水中的杂质，使纯化变得困难，因此腹水在采集后不管是要长期保存还是立即纯化都应该先离心除去细胞的成份，同时也去掉油脂（油脂的密度比较小，一般都漂浮在腹水表面，用枪吸出丢掉即可）。单抗的纯化目前主要有这么几种： (1)盐析/沉淀法； (2)离子交换法；（3）凝胶过滤层析；（4）蛋白A或蛋白G纯化
浆，这种现象是由于切片的原因所致。但是，抗原的表达，在原来的表达上就有核、浆、膜之分。有的抗原可在一个部位表达，有的抗原 则可在两个 部位表达 ，例如PCNA，它可以在细胞核 表达，也可在细胞浆表达 。有的抗原，可表现为双向表达，如上皮(样)肿瘤间皮肿瘤和滑膜内瘤等，用角蛋白标记时，可有阳性表达，用波形蛋白标记时，也可有阳性表达。 对于上述的许多现象，在观察检测时，就要特别地小心，不断地积累经验，以便于更好地鉴别各种抗原的所在部位。某些抗原不是在任何时候能表达出来的它们 需要一定的时间
的关系，亲和力常数的值越高，表明平衡中有更多的抗原可以与抗体结合形成复合物。亲和力常数可由实验得到。例如，用平衡透析实验可以测出抗溴脱氧尿核苷（BrdU）单克隆抗体的亲和力常数。5 在含定量抗- BrdU抗体的溶液中透析不同浓度的放射性标记的BrdU。由于BrdU可以自由平衡地穿过透析膜，膜两边BrdU的浓度应该是相等的。含抗体一侧的放射性活度有任何的增加都是因为抗体结合了标记的BrdU。通过测定透析膜两边的放射性活度，就可以计算出结合抗原的浓度。这些数据的图解描述在图31-1，A中。含抗
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