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- 2025年07月14日
- WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- Mouse小鼠，Human人，Rat大鼠、、、、、
- Rattus norvegicus (Rat)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 形态：
粉末/液体
- 保存条件：
-20℃至-80℃
- 克隆性：
见说明书
- 标记物：
未标记
- 适应物种：
Rattus norvegicus (Rat)
- 宿主：
Mouse小鼠，Human人，Rat大鼠、、、、、
- 应用范围：
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度：
500ug/ml
- 抗体英文名：
Monoclonal Antibody to Renalase (RNLS)
- 抗体名：
肾酶(RNLS)单克隆抗体
- 规格：
200ug
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单克隆抗体制备的基本过程如下：
（1）用抗原免疫小鼠；
（2）从抗原免疫过的小鼠获取脾细胞；
（3）应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞。这种细胞不仅能够像B淋巴细胞一样合成性质稳定的转移性抗体，而且能够像骨髓瘤细胞一样无限复制，这样就可以产生大量且性质专一的鼠源抗体；
（4）对获得的杂交瘤细胞进行筛选，选出能分泌高效价抗体的杂交瘤；
（5）对已筛选出的单个细胞进行鉴定和克隆。
杂交瘤产生的单克隆抗体在各个领域中应用越来越广，有很大的优点和潜力。能够根据需要进行研发生产，可建立稳定的细胞株持续供给应用，相比于抗血清能够减少大量的动物和费用，而且纯度高，均一性好，可作为一种标准试剂。
在获得能分泌高效价抗体的杂交瘤细胞株后，一般有两种方法来获得单克隆抗体：小鼠腹腔注射杂交瘤细胞和细胞培养。
（1）小鼠腹水：
将杂交瘤细胞接种到小鼠的腹腔，杂交瘤在腹腔内增殖，取得腹水进行纯化即可得到抗体。此法易于操作，重复性高，且花费少，得到的抗体量多，但伤害动物，而且当需要大规模制备抗体时需要大量动物。
（2）细胞培养：
将杂交瘤细胞进行培养，培养后的上清液中即含有抗体。这种方法适合大规模生产抗体。但是这种方法获得的抗体杂质相对较多，因为细胞上清含有培养液，pH指示剂，细胞代谢废物等。而且培养用的血清中的成分不明确，可能会含有能影响抗体纯度的杂蛋白。所以在细胞培养中会逐渐将杂交瘤细胞通过逐步减少血清来驯化到无血清培养。
总之，单克隆抗体的高特异性，重复性使其在生物研究以及医药方向都有良好的应用基础以及前景。
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然而，要想得到一张高质量的免疫组化染色切片也并非易事。由于切片制作和免疫组化染色过程均存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都需要操作者严格控制实验条件，否则可能会影响到最终结果。
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文献和实验1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几个抗原决定簇，用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来
，一般在1-2之间。酶结合率=酶量×体积/抗体，标记率一般为0.3-0.6，即1-2个HRP分子结合在一个抗体分子上，标记率可大于0.6，0.8，0.9；OD403/OD280等于0.4时，E/P约为1。标记率=OD403/OD280酶活性和抗体活性的测定可应用ELISA法、免疫扩散、DAB-H2O2显色反应测定酶结合物的酶活性，抗体活性及效价、特异性。（8）HRP抗体结合物的保存：加入等量甘油后，小量分装-20℃存放，防止反复冻融；或加入等量60%甘油4℃保存；不宜加NaN3或酚防腐，否则会影响酶活
清培养基，在其中至少必须添加胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺和亚硒酸钠这四种成分，才能起到类似血清的作用，其他较重要的添加剂包括白蛋白、亚油酸和油酸、抗坏血酸以及锰等一些微量元素。采用无血清培养基培养杂交瘤细胞制备单抗，有利于单抗的纯化，有助于大规模生产，可减少细胞污染的机会，且成本较低。但无血清培养细胞的生产率低、细胞密度小，影响了单抗的产量；同时无血清培养基还缺少血清中保护细胞免受环境中蛋白酶损伤的抑制因子等。尽管如此，无血清培养基终究会成为杂交瘤细胞培养的理想的培养基。
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