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- 2025年10月15日
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文献和实验【公告】静态资源索引(酶切,载体图谱,PCR,核酸提取,T-A克隆)-发帖前必读(基本上已补全)
://www.dxy.cn/bbs/thread/5079028http://www.bioon.com/experiment/List_1719.shtml细菌http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3342261_1.html载体图谱:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=133&id=1149636&sty=2http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=133&id=3503260&sty
lmnsmu PCR产物酶切后做克隆难度较大，可能与酶切后目的基因的量有关，而且你的片段相对大； 我的建议是：将纯化的PCR产物先与T载体相连构建T_A克隆（一般的Taq酶PCR扩增后两端会形成A），然后鉴定T载体中目的基因是否正确；若插入正确，培养细菌提取重组的T克隆进行酶切得到目的基因，然后再与相应的酶切质粒连接。另外目的基因与质粒的比例3:1~10:1，目的基因的量应该大些。 祝好运！ robustandy
3`-T突出端的载体用于直接高效地连接PCR产物。系统中也包含感受态细胞和S.O.C培养基, 使得实验操作更为简单方便。所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理（Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆）。不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。图32 The TA Cloning® ConceptTopo TA克隆方法（Topo TA Cloning Kit）Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T
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