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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 供应商:
齐一生物科技(上海)有限公司
- 检测范围:
详细请见说明书
- 检测方法:
elisa酶联免疫分析法
- 应用:
科研检测
- 样本:
血清,血浆,尿液,胸腹水,脑脊液,细胞培养上清,组织匀浆等
- 规格:
48T/96T
检测标本:血清,血浆,尿液,胸腹水,脑脊液,细胞培养上清,组织匀浆等
检测方法:ELISA
检测类型:酶联免疫夹心法
产品的用途:仅供科研究课题使用
价格及详细资料:电议,或咨询在线客服QQ,或者以邮件形式发到我司邮箱qysw@qiyibio.com .齐一生物科技(上海)有限公司提供的试剂盒受到了广大科研单位的一致肯定和认同。大品牌保证,价格公道,倾力为国内外科研院校实验室提供质的产品。若有需要,我司将竭诚为您服务!
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中该产品水平。用纯化的本产品抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入本产品抗原,再与HRP标记的本产品抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的本产品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中该产品浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存
说明书 1份 1份
封板膜 2片(48) 2片(96)
密封袋 1个 1个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品:1800ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1200 ng/L,800 ng/L ,400 ng/L,200ng/L, 100 ng/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存;2-8℃。
2.有效期:6个月
齐一生物科技有限公司主要经营进口原装Elisa试剂盒可检测人源,小鼠,大鼠,猪,狗,猴,兔,羊,鸡,牛,鸭子,鱼,植物等各种样本,如有什么问题请给我们电话或者留言,告诉我您的需要,并留下您宝贵的意见和建议。购买我公司产品的新老客户,可享全程技术指导:(包括售前的标本收集,使用过程中问题,实验结束后的数据分析,有任何疑问,我公司提供全程技术服务)购买ELISA试剂盒免费代测的服务:(您只需把标本寄过来,我们为您节省时间,帮您出结果,原始数据,分析数据均可提供,实验时间五个工作日左右给您结果)
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文献和实验。结合物溶液中加入等体积的甘油可在低温冰箱或普通冰箱的冰格中较长时间保存。早期的ELISA试剂盒中的结合物一般均按以上两种形式供应,配以稀释液(见3.2.5)临用时按标明的稀释度稀释成工作液。现在较先进的ELISA试剂盒均已用合适的缓冲液配成工作液,使用时不需再行稀释,在4-8℃保存期可达6个月。由于蛋白质浓度较低,结合物易失活,需加入蛋白保护剂。另外再加入抗生素(例如庆大霉素)和防腐剂(HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠),以防止细菌生长。3.2.5 结合物的稀释液用于稀释高浓度的结合
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