人总胆汁酸（TBA）ELISA检测试剂盒

人总胆汁酸（TBA）ELISA检测试剂盒产品规格：96T/48T
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ELISA试剂盒操作步骤
ELISA试剂盒使用前,将所有试剂充分混匀.不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差.
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数.每个标准品和空白孔建议做复孔.每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔.标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内.
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内.立即加入50ul的生物素标记的抗体.盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时.
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干.重复此操作3次.如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次.
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟.
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干.重复此操作3次.如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次.
每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟.避免光照.
取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果.
在450nm波长处测定各孔的OD值.
ELISA操作步骤
酶联免疫吸附实验材料,试剂,溶液
1．酶标板,100μltip头,1mlEp管,湿盒
2．包被稀释液（0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢钠buffer,pH9.6）
碳酸钠0.15g,碳酸氢钠0.29g,叠氮钠0.02g,加双蒸水至100ml,调至pH9.6
3.封闭液(5%小牛血清/PBS溶液)
小牛血清5ml,1*PBS(pH7.4)95ml
4.洗涤液(PBST,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,Tween200.05ml,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH7.4
5.样本稀释液(PBS,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH7.4
6.酶标第2抗体(羊抗兔)稀释范围1:5,000-1:100,000
7.底物液(TMB-过氧化氢尿素溶液)
①底物液A:TMB20mg,无水乙醇10ml,加双蒸水至100ml.
②底物液B(0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸二氢钠缓冲液,pH5.0-5.4)
Na2HPO41.46g,柠檬酸0.933g,0.75%过氧化氢尿素0.64ml,加三蒸水至100ml,调至pH5.0-5.4
③底物A和B按1:1混合即成TMB-过氧化氢尿素溶液.
8.终止液(2mol/LH2SO4溶液)双蒸水200ml,浓硫酸34ml,(缓慢滴加并不断搅拌),加双蒸水至300ml9.0.9%生理盐水

操作步骤:
1.包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):
将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;弃去孔中液体.(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)
2.封闭酶标反应孔:
5%小牛血清置37℃封闭40min.封闭时将封闭液加满各反应孔,并去除各孔中的气泡,封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
洗涤方法:吸干孔内反应液,将洗涤液注满板孔,放置2min略作摇动,吸干孔内液,倾去液体后在吸水纸上拍干
洗涤次数3次
3.加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):
检测时一般采用1:50-1:400的稀释度,应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量>20μl.
将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每样品至少加双孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
4.加入酶标抗体:
酶标抗体:根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行.37℃,30-60min之间.短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前.
5.加入底物液(现用现配):
TMB-过氧化氢尿素溶液,OPD-过氧化氢底物液系统次之.
底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分钟,加入终止液显色.
6.终止反应:
每孔加入终止液50μl终止反应,于20min内测定实验结果.
7.结果判断:
OPD显色后采用492nm波长,TMB反应产物检测需要450nm波长.检测时一定要首先进行空白孔系统调零.用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示,当P/N大于2时作为抗体的效价.(数值的大小依具体检测要求而定.)
其它产品
简介：
ELISA检测试剂盒、ELISAKit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,得到全世界科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展.Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法.由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中.ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM抗体ELISA检测
2用途
elisa技术流程
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记.结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性.在测定时,受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开.再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上.此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例.加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析.由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度.ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体.
然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点.
试验原理
试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测.先将生物素标记的抗体同时温育.洗涤后,加入亲和素标记过的HRP.再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用.产生颜色.颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系.
原理
免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体,酶等.以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备.近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现.
HBsAg试剂特点（检测模式：临床抗体夹心法）：包被抗体为山羊多抗.多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性.酶表抗体为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位,可测得HBsAg变异样品,提高检测的特异性（99.98%）提高检测的灵敏度,应用ParlEhrich学说（PEI）HBsAg标准品,对ad标准品的灵敏度为0.05ng/ml对ay标准品灵敏度为0.025ng/ml
ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3.将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEVIgM抗体,这些抗体就会与HEV的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份.然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEVIgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEVIgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长:450nm处测量O.D.值,按照本HEVIgM抗体elisa试剂盒的测试标准,O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性.
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