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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
662
- 供应商:
齐一生物科技(上海)有限公司
- 检测范围:
详细请见说明书
- 检测方法:
ELISA酶联免疫法
- 应用:
科研检测
- 适应物种:
人
- 标记物:
见说明
- 样本:
血清,血浆,尿液,胸腹水,脑脊液,细胞培养上清,组织匀浆等
- 规格:
48T/96T
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量.
说明
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时).
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶.
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准.
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响.
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色.TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度.
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔).
2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品).
3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶.
4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶.
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶.
6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶.
9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍.
10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N ).
10、标本的采集及保存
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃隔夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测.
人抗α-胞衬蛋白抗体IgGIgA(α-FodrinIgGIgA)ELISA检测试剂盒标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数.只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的.稀释的过程中,应做好详细的记录.最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”.
标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制.
如配制150 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推.
生物素标记抗体的稀释原则:
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml.如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制.
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml.如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制.
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文献和实验41的融合蛋白。其构建了重组的单链Fv(Single chain,Fv,scFv)抗体片段,scFv由抗红细胞膜血型糖蛋白抗体重链可变区(Vh)和轻链可变区(V1)组成,其间由15个残基-(GGGGS)3-连接体相连,在轻链可变区末端有来自HIV-1 gp41表面糖蛋白C末端八肽尾(FLAG)或-35肽。将此构建克隆入大肠杆菌表达载体pHFA,培养后,得到重组蛋白,即基因工程双功能试剂。在此基础上,建立了快速、灵敏和特异的自身红细胞凝集试验。基因工程抗体及其双功能试剂由于抗体分子小型化,因而具有较好
和改进,由于这种方法采用放射性核素标记,应用范围受到一定限制,为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性,进入90年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA检测试剂盒,这一类检测方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应,所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗,毫无疑问,兔多抗在约四十年的cAMP,cGMP定量检测中做出了巨大贡献,但同时它也有着明显的缺陷: 1,兔多抗对cAMP,cGMP的特异性不高,会
2.4 灵敏度高 微球表面积大,每个微球上可包被100 000个捕获抗体,如此高密度的捕获抗体保证了能够最大程度地与样本中的抗原分子结合,提高检测灵敏度。最低检测浓度可达到0.1 pg/ml. 2.5 检测范围广 可达3~5个数量级(如Bio Rad公司细胞因子检测试剂盒的检测范围达到0.2~32 000 pg/ml,样品无需浓缩或稀释。 [$page$] 2.6 特异性强 无需洗涤就能够自行将和微球结合的与未结合的分子区分开来,只读
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