SDS-PAGE蛋白质超低分子量多肽

SDS-PAGE蛋白质电泳常见问题分析

SDS-PAGE电泳主要利用聚丙烯酰胺 的分子筛效应分离蛋白质和核酸，SDS-PAG蛋白质电泳分析可从蛋白质亚基分子量的大小就分离蛋白质。 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS-Page 电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论： Q：SDS-PAGE电泳 的基本原理? A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二

免疫印迹（Western Blotting）实验

对实验结果至关重要，应选择合适的内参。 二、电泳 电泳分为非变形凝胶电泳和变性凝胶电泳，Western Blotting中常用的是不连续缓冲系统下的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），该法中由于变性的多肽与SDS结合而带负电荷，在凝胶电泳中迁移率仅与多肽的分子量相关。凝胶的筛分特性取决于它的孔径，而孔径又是灌胶时所用丙烯酰胺和双丙烯酰胺绝对浓度的函数。 SDS聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围 丙烯酰胺浓度（%） 线性分离

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量（垂直板型电泳）（图）

  　　⑥1ml注射器及6号长针头　　⑦微量注射器（10μl或50μl）              　　⑧水泵或油泵　　⑨真空干燥器                            　　⑩培养皿（直径120mm） 2．试剂： （1）标准蛋白质 目前国内外均有厂商生产低分子量及高分子量标准蛋白质成套试剂盒，用于SDS-PAGE测定未知蛋白质分子量。 ①高分子量标准蛋白试剂盒（Pharmacia公司产品，表中16-1）。 表16-1  5种标准蛋白质 同时按说明书要求处理 ②