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- YM-KJ0436
- 2025年08月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
远慕生物
- 检测范围：
科研实验
- 检测方法：
双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)
- 样本：
血液、尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等
- 规格：
96T/48T
人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒说明书
上海远慕生物长期提供：ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、抗体、抗原、标准品等，价格实惠，质量有保证,信誉第一，竭诚欢迎新老客户咨询洽谈业务！
Human Collagen Type Ⅳ,Col Ⅳ ELISA KIT
产品货号：YM-KJ0436
规格：96T/48T
欢迎来电咨询订购：Elisa试剂盒，人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA检测试剂盒
【实验准备】：
1. ELISA试剂盒及待测样本
2. 酶标仪(450nm波长滤光片)
3. 高精度移液器，EP管及一次性吸头
4. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
【标本要求】：
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3. 尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞:
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6. 组织标本:
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 .
8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
【操作步骤】：
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，依次进行稀释数倍。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍（48T 的20 倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
【计算结果】：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
0.2IU/L - 6IU/L
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文献和实验Ⅳ型超敏反应机制 经典的迟发型超敏反应可由结核杆菌皮内注射而诱发。如果宿主曾经接触过结核杆菌，就会在24-72h后出现一个由T细胞介导的局部炎症反应。抗原接种大约4h之后，中性粒细胞在注射部位开始迅速聚集，血管内皮细胞也显示出一系列的形态和功能变化，包括生物合成的增加，细胞器合成的加速，并且发生血浆大分子的渗漏。血纤蛋白原(hbrin。gen)从血液渗透进入周围组织。纤维沉积和部分T细胞及单核细胞聚集，使注射部位的血管外组织形成肿胀和硬结。作为DTH的一个
复合物Ⅳ又称细胞色素c氧化酶(cytochrome c oxidase)。总相对分子质量为200kDa。复合物Ⅳ是以二聚体的形式存在，它的亚基Ⅰ和Ⅱ都含有4个氧化还原中心(redox-active centers)和两个a型细胞色素(含有1个a、1个a3)和两个Cu。主要功能是将电子从细胞色素c传递给O2 分子, 生成H2O∶4cyt c2 O2 4H → 4cyt c3 2H2O。每传递一对电子,要从线粒体基质中摄取4个质子,其中两个质子用于水的形成,另两个质子被跨膜转运到膜间隙
靶细胞时，还会释放出各种淋巴因子，引起单核细胞浸润为主的炎症变化，甚至坏死。主要病变是以单核细胞为主、由溶菌酶类引起的组织坏死。除接触性皮炎和某些自身免疫性疾病外，其他Ⅳ型变态反应都无个体差异。Ⅳ型变态反应的发病机理与细胞免疫反应基本相同，两者同时并存。由此可见，当致敏T细胞与相应抗原结合、发生反应后，对机体有有利的一面（细胞免疫的免疫防护作用），也有有害的一面（Ⅳ型变态反应）。一般来讲，正常的细胞免疫反应既能局限和排除病原微生物，又不致造成组织的严重损伤。若反应过于强烈，超过正常，则会造成
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