生物素快速标记试剂盒

生物素快速标记试剂盒

Biotin Quick Labeling Kit

 

产品货号：	ARL0020K	有效期：2-8℃    18个月
主要组分：	活性生物素           2mg/4mg/6mg       超 滤 管             0.5mL/4mL/15mL 标记缓冲液           30mL/60mL/90mL    标记物保存液         2mL/4ml/10ml 助溶剂（DMSO）       1mL/1.5mL/2mL

 选购之前客户需要根据待标记物的分子量大小和标记量选择最适宜的型号

产品编号	最大标记体积	待标记物最小分子量	可标记抗体量
ARL0020K-3K-0.5mL	0.5mL	3kDa	0.2-40mg
ARL0020K-3K-4ml	4.0mL	3kDa	1.0-80mg
ARL0020K-3K-15mL	15mL	3kDa	5.0-120mg
ARL0020K-10K-0.5mL	0.5mL	10kDa	0.2-40mg
ARL0020K-10K-4.0mL	4.0mL	10kDa	1.0-80mg
ARL0020K-10K-15mL	15mL	10kDa	5.0-120mg
ARL0020K-30K-0.5mL	0.5mL	30kDa	0.2-40mg
ARL0020K-30K-4.0mL	4.0mL	30kDa	1.0-80mg
ARL0020K-30K-15mL	15mL	30kDa	5.0-120mg
ARL0020K-50K-0.5mL	0.5mL	50kDa	0.2-40mg
ARL0020K-50K-4.0mL	4.0mL	50kDa	1.0-80mg
ARL0020K-50K-15mL	15mL	50kDa	5.0-120mg
ARL0020K-100K-0.5mL	0.5mL	100kDa	0.2-40mg
ARL0020K-100K-4.0mL	4.0mL	100kDa	1.0-80mg
ARL0020K-100K-15mL	15mL	100kDa	5.0-120mg

 

产品介绍：

本生物素快速标记试剂盒提供了生物素快速标记所需全部试剂，用于含有伯氨基（NH2-）的蛋白/抗体/多肽或者其他大分子的标记。其反应原理如下:

 产品特点：

l   使用方法简单，无需额外准备试剂；

l   节约时间，整个过程仅需 90min；

l   通过离心脱盐和去除游离的生物素，无需透析或者凝胶过滤；

l   既可用于微量标记又可大量标记，每次可标记 0.2-2mg；

 

生物素标记使用量的计算：

每个反应中生物素试剂的使用量取决于待标记蛋白质的量和浓度。通过我们实验数据分析表明，标记2mg/ml 的抗体（IgG ，150KD），生物素和抗体的分子比为 20:1 能达到最佳效果；其他蛋白的标记可以根据实际情况，参照此比例类推。 

 

 

其中：

V(µL)为生物素的体积；                       V1(mL)为待标记物（蛋白/抗体/其他含有伯胺-NH2的大分子）；

C1(mg/mL)为待标记物的浓度；                 R 为生物素与待标记物的分子比例；

M为待标记物的分子量（道尔顿，Dalton，Da）   C(mM)为生物素的浓度

 

计算示例：我们将生物素配置成10mM的浓度，用来标记1mL的2mg/mL 的抗体（IgG ，150KD），准备加入的生物素与抗体的比例为20:1，那么带入公式计算

实验前准备： 

1.按照生物素标记使用量的计算的公式计算所需要的生物素的量。

2.提前 20min 从冰箱中取出试剂盒，使试剂盒各组分平衡至室温。

3.用助溶剂DMSO将活性生物素配制成10mM(2mg生物素加DMSO 440ul)。

 特别提示：

A.       溶解的活性生物素建议一次性使用完，使用不完可以密封放在-20℃的冰箱内，一月内可以使用，但标记效率会降低；

B.       生物素助溶剂使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。

操作步骤：（本操作步骤按照 1mg抗体的量进行标记）

1.   取1mg 待标记抗体于超滤管中，并加入相应体积的标记缓冲液，使抗体的终浓度为 2mg/mL，12,000 x g 离心 10min。

请注意：

A.如果待标记抗体浓度低时，可先超滤离心浓缩；

B.如果待标记物含有游离的氨基（Tris，氨基酸或者其他干扰物，需要用标记缓冲液反复超滤确保其去除干净）

2. 加入13.3µL生物素溶液和适量标记缓冲液至上述超滤管中，并轻轻吹打混匀。放入 37℃恒温箱中避光温育 30min。

（若抗原为小分子或特殊物质，建议室温孵育2小时或以上时间）

3. 12,000 x g 离心 10min。

4. 加入适量标记缓冲液至上述超滤管中，并轻轻吹打混匀，12,000 x g 离心 10min， 重复此步骤多次。

5. 收集超滤管中的溶液（即生物素标记的抗体），加入等体积保存液（根据后续实验选择添加），-20℃保存。

注意事项：

1. 本试剂盒也可标记其它含有氨基（NH2-）的抗原、HRP、多肽，具体标记比例根据待标记物中氨基的数量确定。

2. 本试剂盒中的生物素助溶剂为DMSO ，使用完毕后要密封干燥保存。

3. 本试剂盒未开封前的有效期为18个月，请在有效期内使用;本试剂盒中的生物素加入助溶剂之后，如果使用不完，请密封放在-20℃保存，一周内可以正常使用，如果超过一周，使用量请酌情加大；超过一个月请不要再使用。

4. 请注意试剂盒中提供的超滤管的规格和分子截流大小来确定是否适合您的最佳标记条件；

5. 在步骤 2 中，标记其它抗体时，我们最好控制抗体的终浓度为 2mg/mL，然后再根据抗体的量计算应加入活性生物素的体积。

*本试剂仅供实验室研究使用