CCK-8试剂盒

产品介绍
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四氮单钠盐），广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
其原理：在电子耦合剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲瓒。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
该试剂盒具有简单、省时、灵敏度高等特点。
用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。

包装规格

产品编号	Lot B150927	Lot B150928	Lot B150929	Lot B150930	保存条件
规格	100次	500次	1000次	3000次	4℃避光1年

使用方法
1、接种细胞：用0.25%胰酶消化液将细胞消化成单个细胞，用1×PBS洗涤、计数，进行后续实验：细胞增殖实验，通常每孔加入100ul 2000~3500个细胞；细胞毒性实验每孔加入100ul 5000~10000个细胞（具体每孔所用细胞的数目，根据细胞的大小、增殖速度快慢等因素决定），按照实验需要，加入适量的药物刺激。
2、培养细胞：将培养板移入CO2培养箱中，在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下，培养3~5天（培养时间取决于实验目的和要求）。
3、呈色：培养3~5天，每孔加入10ul CCK-8溶液（如果起始培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液），37℃，继续孵育1~4h。
4、比色：选择450nm波长（如果没有450nm滤光片，可以使用吸光度在430~490nm之间的滤光片，但450nm滤光片的检测灵敏度最高）在酶联检测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生长曲线。

注意事项
1、此产品为无菌包装，注意无菌操作。
2、如需长期保存，请将CCK-8溶液放置-20℃保存。
3、选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一个孔内贴壁细胞长满时约有10⁵个细胞；在试验前，对每一种细胞都要测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，然后确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证试验终止时不致细胞过满。
4、酶标仪检测前，确保每个孔没没有气泡，否则会干扰测定。
5、设空白对照。与试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照孔，最后比色时，以空白孔调零。
6、避免血清干扰。一般选择＜10%胎牛血清的培养液进行试验。