赛拓生物科技有限公司提供:
1. 普通TaqMan探针合成
2. AllGlo探针合成
3. LNA-TaqMan探针合成
TaqMan-MGB探针合成服务
MGB的英文全称为Minor Groove Binder, 与传统的TaqMan探针比较,有以下优势:
1、可以使探针的长度缩短,尤其对AT含量高的序列的MGB探针的设计有很大的帮助;
2、提高配对与非配对模板间的Tm值差异;
3、由于在探针的3’端的Quencher基团为不发光的荧光基团,并且与Report基团在空间的位置更接近,使杂交的稳定性大大提高,实验的结果更精确,分辨率更高;
4、新探针实验优化步骤简单,杂交的稳定性大大提高重复性大大提高。
MGB探针的应用:
1、荧光定量PCR:利用实时荧光定量PCR的原理,对DNA靶分子(cDNA、mRNA)的起始拷贝数进行定量的一种核酸检测系统。该方法精确、灵敏、污染途径少,是国际公认的核酸分子定量的标准方法,目前已大量应用到基因表达的研究以及荧光定量PCR试剂盒的开发中。本公司拥有ABI7700、ABI7900等全自动定量PCR仪,可以提供从荧光探针设计、合成到定量PCR实验、实验结果分析等一整套技术服务,是您科学研究、项目开发工作的好帮手。
2、SNPs检测:SNP(单核苷酸多态性)在基因组学,功能基因组学及药物基因组学中的重要性已日益显现,已经成为基因功能研究,寻找疾病基因和基因型鉴定的主要研究手段。基康公司利用自己先进的技术平台推出了新的SNP服务,服务包括新SNP位点的发现及已知SNP位点的高通量鉴定。利用已成熟的DNA大规模测序技术平台可以发现及确认新的SNP位点,并且能估算特定的SNP位点在人群中发生的频率。同时公司引进并建立了整套的TaqMan-MGB-探针合成、荧光PCR的SNP检测技术平台,其中包括7900全自动高通量荧光PCR检测仪及7700荧光PCR检测仪。应用上述平台我们可以在最具竞争性的价格条件下提供高精确度、高通量(每天不少于500个反应)、全自动化数据处理的SNP检测服务。在样品量较大的情况下TaqMan-MGB方法在价格、通量及自动化等诸方面都远远优于目前DNA的测序技术。
ALLGlo探针
AllGlo(TM)探针是美国AlleLogic Biosciences公司推出的最新一代荧光定量探针,它打破传统Taqman探针的一端报告基团一端粹灭基团的限制,利用美国AlleLogic Biosciences公司生物化学专家大量研究开发,获得美国专利技术的几种常用波长的特制荧光染料,该系列染料标记在oligo上面互相互为报告及粹灭基团,而且上面含有特殊的可以大大提高TM值的化学基团,可以大大提高探针特异性,经同类比较,杂交特异性大大超过Taqman及Taqman-MGB,在杂交水解之后两端标记的染料又全部变为报告基团,大大提高荧光增量。
AllgloTM探针的优势:
1 、提高TM值(可高达10℃以上)
A、探针更短,可以15-16mer
B、可以适用于A、T含量比较高的序列设计探针
C、大大提高探针配对和非配对的TM值差异
2、加大多重荧光定量PCR的选择
A、5-7种专利荧光选择,适用于所有品牌荧光定量PCR仪所有通道
B、每种染料即是报告基团又是粹灭基团,打破传统Taqman探针,因为波长原因标记选择困难,不受 粹灭基团波长的限制
3、提高信噪比
A、无背景荧光
B、空间距离近,更好的淬灭效果
C、探针两端荧光即可相互粹灭,水解后又可报告荧光
AllgloTM探针的应用:
1、病原体检测; 2、基因定量; 3、SNP分型; 4、多重定量。
AllgloTM探针的合成:采用DHPLC纯化
标记种类 |
吸收波长 |
发射波长 |
相当于目前常用荧光 |
MARTM |
485-505 |
515-530 |
FAM |
JUPTM |
515-535 |
540-560 |
VIC、HEX、JOE |
SATTM |
545-565 |
570-590 |
TAMRA、CY3、NED |
URATM |
575-595 |
600-620 |
ROX、Texas Red |
NEPTM |
635-655 |
660-680 |
CY5 |
LNA-TaqMan探针
LNA (Locked Nucleic Acid)
是一种核酸类似物,和普通核酸分子区别在于在其碳环的2'氧原子和4'碳原子位置引入亚甲基桥形成锁状结构(见下图),因此也称锁核酸。
LNA 荧光探针优点:
1.增强热稳定性和杂交的特异性
对实时定量PCR探针提出LNA化学产品增强双链体的热稳定性,同时加强对目标序列杂交的特异性。因此,由非所需激活的荧光背景将大量减少,从而使信号对背景噪音的比例增大。
LNA 单分子的化学结构决定了其探针与目标序列杂交后的稳定性,与普通的DNA荧光探针相比,其双链在相同的盐溶液中,每增加一个单体LNA分子将导致其熔点提升8°C。强化后的杂交性能可以显著的扩大实验检测的环境限制,同时允许在单试管中进行更复杂的试验。可以通过调整LNA碱基在探针中的位置来调节最佳熔点(Tm)和杂交的特异性。
2.更易及灵活的探针设计来检测有问题的目标序列
由于LNA 强化的杂交特征和对熔点温度的影响,含有LNA的实时定量PCR探针,长度较短,可以增加设计的灵活性,同时附和检测设计的指南。因此普通DNA探针某些设计的局限或无法解决的问题都可被减少或消除。
例如, 含大量AT的实时定量PCR探针通常需要30碱基以上(有时超过40碱基)来达到扩增设计的指南,但是可能效果较差。LNA荧光探针的应用可灵活选择LNA的位置,以达到高特异性的设计,短的探针可以很有效的工作,甚至短到13到20个碱基。
3.适用于多种实时定量PCR 系统
LNA 荧光探针适用于多种实时定量PCR 系统,这基于染料和设备的激发/发射的波长。这为您提供在固定的周期实验环境下自由的选择仪器与试剂系统的组合。这无需额外的资本投入。