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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 供应商:
上海信帆生物
- 检测范围:
见说明书
- 检测方法:
ELISA方法
- 应用:
科研
- 适应物种:
人,大鼠,小鼠
- 样本:
血清,血浆及相关液体
- 规格:
96T
ELISA试剂盒自备材料:
1. 酶标仪。
2. 自动或者手工洗板机。
3. 恒温箱。
4. 可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,好用多通道移液器。
5. 干净的试管和Eppendof管。
ELISA试剂盒操作步骤:
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照图表在小试管中进行稀 释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl, 然后再加待测样品 10µl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10.终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
ELISA试剂盒标准曲线的绘制注意事项:
1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。
2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度陡段,即曲线几乎成直线的范围内。
3、好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,ELISA试剂盒这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
4、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。
5、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。
6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999.
上海信帆是的ELISA试剂盒销售供应商,有专门的技术部门,全程提供技术指导和免费代测服务,提供售后服务,欢迎来电咨询。
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