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文献和实验混合液,十字形慢慢晃动混匀3 次,370 C 5%CO2 孵箱中培养90 分钟。此时MOI 值约为25。 5 加入DMEM5%至30ml。 6 再培养48~72 小时。此时10ml 培养液病毒量约为3×1010 ~3×1011 。若需要,进行MOI 测定以估计病毒滴度。 注:如果此时病毒量已可以满足实验所需,则可立即进入病毒滴定步骤。600×g 离心5 分钟收集细胞,弃上清,加入1/10 原始体积的溶液重悬细胞。-200 C /370 C 冻融3 次,台式离心机上以最大速率沉淀细胞
离心机上最大速率离心10 分钟,取出上清保存。 13. 30 瓶175 cm2 培养瓶中每瓶各加入107 293 细胞。 14. 将45ml 细胞裂解液上清加入105ml DMEM5%混匀,从培养瓶中移去培养液,加入5ml 混合液感染细胞,十字形缓慢晃动3 次混匀,370C 培养90 分钟。此时MOI 值约为25。 15. 加入DMEM5%至30ml/瓶。 16. 再培养48-72 小时,此时约有3×1011~3×1012个病毒。若需要,进行MOI 测定估计病毒滴度。 如果要收集
材料类型很多(本书只选择某一种或几种植物材料进行介绍),如做四强雄蕊的实验,就可以选择油菜、萝卜、荠菜等植物材料中的任意一种;(2)同一种材料可以同时观察多个实验内容,如用油菜作实验材料,可同时进行的实验内容有:直根系、草本、十字花冠、四强雄蕊、复雌蕊、侧膜胎座、角果等。因此,在实验过程中,我们常将上述两方面结合起来,既可节省实验材料,也提高教学效果。本文采用按植物器官类型对实验内容进行归类的编排方式。这样做的好处是,在做同一大类的实验时,可以及及时地对同类型的所有项目进行相互比较(如雄蕊部分中的四强
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