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康朗生物
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g/mg
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文献和实验2重悬每份沉淀,放置于冰浴上。我们发现将1mol/L CaCl2贮存液[用纯水(Mille-Q级或与其相当的级别)配制]以10ml小份贮存于-20℃煞是方便。制备感受态细胞时,取一小份融化,用纯水稀释至100mlk,用Nalgene滤器 (0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷到0℃即可。对于大多数大肠肝菌菌株(除MC1061外),在这一步采用TFB(见表1.3)代替氯化钙可得到相同的或更好的结果。 6)于4℃以4000转/分离心10分钟,以回收细胞。 7)倒出培养
摘要: 本文主要介绍了用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌的实验方法.下面的方法是对Cohen等于1972年发表的方法更为便捷的修改. 下面的方法是对Cohen等于1972年发表的方法更为便捷的修改.这一方法可以用于批量制备感受态细胞,其转化效率可达到5×106-2×107个转化克隆/ug超螺旋质粒 DNA .这个转化效率对于方便地进行
下面的简单方案是Clhen等(1972)所用方法的变通方案,常用于成批制备感受态细菌,这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107 个转化菌落,这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要。该方法完全适用于大多数大肠杆菌菌株,并且比方案I快速,重复性更好。该法制备的感受态细胞可贮存于-70℃,但保存时间过长会使转化效率在一定程度上受到影响。1、从于37℃培养16-20小时的新鲜平板中挑取一个单菌落(直径2-3mm),转到一个含有100ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中
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