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- 2025年07月12日
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常温，避光
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12个月
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大量
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钰博生物
- 规格：
g/mg
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文献和实验2重悬每份沉淀，放置于冰浴上。我们发现将1mol/L CaCl2贮存液[用纯水(Mille-Q级或与其相当的级别)配制]以10ml小份贮存于-20℃煞是方便。制备感受态细胞时，取一小份融化，用纯水稀释至100mlk，用Nalgene滤器 (0.45μm孔径)过滤除菌，然后骤冷到0℃即可。对于大多数大肠肝菌菌株(除MC1061外)，在这一步采用TFB(见表1.3)代替氯化钙可得到相同的或更好的结果。 6)于4℃以4000转/分离心10分钟，以回收细胞。 7)倒出培养
摘要： 本文主要介绍了用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌的实验方法.下面的方法是对Cohen等于1972年发表的方法更为便捷的修改. 下面的方法是对Cohen等于1972年发表的方法更为便捷的修改.这一方法可以用于批量制备感受态细胞,其转化效率可达到5×106-2×107个转化克隆/ug超螺旋质粒 DNA .这个转化效率对于方便地进行
下面的简单方案是Clhen等（1972）所用方法的变通方案，常用于成批制备感受态细菌，这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107 个转化菌落，这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要。该方法完全适用于大多数大肠杆菌菌株，并且比方案Ｉ快速，重复性更好。该法制备的感受态细胞可贮存于-70℃，但保存时间过长会使转化效率在一定程度上受到影响。1、从于37℃培养16-20小时的新鲜平板中挑取一个单菌落（直径2－3mm），转到一个含有100ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中
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