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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
1000
- 供应商:
康朗生物
- 检测范围:
见说明书
- 检测方法:
酶联免疫
- 应用:
科研
- 标记物:
见说明书
- 样本:
血清/组织/尿液
英文学名:CaSR ELISA kit
科研名称:人钙敏感受体(CaSR)elisa定量试剂盒
实验名称:人钙敏感受体(CaSR)ELISA试剂盒
规格:48T/96
保存:2-8℃(低温避光)
产品的用途:仅供科研ELISA检测试剂盒。
检测种属:人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。
ELISA常用的方法:双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。
人钙敏感受体(CaSR)ELISA检测试剂盒(血清):血清是最常用于ELISA检测的一类样本,处理也比较简单。
用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清析出。(最好将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g离心20分钟,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
(血浆):用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等,检测时还应仔细阅读试剂盒说明书,检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。
(细胞培养上清):取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
人钙敏感受体(CaSR)ELISA检测试剂盒(细胞裂解液):
1) 吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
2) 收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。
3) 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
4) 将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
5) 4℃ 10000×g 离心10min,除去细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
(组织匀浆液):
1) 将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。
2) 将组织块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于匀浆得更充分
3) 将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆时置于冰上或冰浴中。(通常按组织重量:PBS体积=1:9的比例匀浆,例如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)
4) 吸取匀浆液到离心管,4℃ 5000×g 离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
人钙敏感受体(CaSR)ELISA检测试剂盒(尿液、唾液等其他液体生物样本):1000×g离心20min,取上清即可检测。
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文献和实验升高,分别作用于骨、肾脏以及小肠等器官促进钙释放与吸收,从而上调血钙浓度;而当血钙浓度升高时,PTH 分泌降低,从而促使血钙回落至正常水平。 这些生理过程主要是由表达在甲状旁腺主细胞上的钙敏感受体(Calcium sensing receptors, CaSR)感受血钙浓度来实现对 PTH 的分泌调控的。然而在甲状旁腺亢进等病理条件下,甲旁腺主细胞增生并且无法精确感受血钙浓度变化,进而无法反馈调节 PTH 的高水平分泌。 「PTH 的异常增高导致病人出现高钙血症、情绪异常和骨丢失等系列症状
生物素的酶分子,从而大大提高了灵敏度; ④生物素和亲和素间亲和力强,故二者一旦结合,就极为稳定,不受在 ELISA 方法中的保温及多次洗涤影响,而且这种结合反应时间比抗原抗体反应所需时间短; ⑤结果专一性强,非特异性显色或染色背景极低; ⑥第一抗体稀释度高,可节约抗体。 原理 生物素或亲和素与抗体分子或标记物结合后,既不影响前者的亲和力,也不改变后者的特性。亲和素分子的 4 个活性部位并非都和连接在抗体分子上的生物素残基结合,剩下的游离部位尚可作为另一种生物素标记蛋白质的受体。这些特点就是 BAS
性较差。小试管作为固相载体也有较大的吸附表面,而且标本的反应量也相应增加。板式及珠式ELISA的标本量一般为00-200ul,而小试管可根据需要加大反应体积,标本反应量的增加有助于试验敏感性的提高。小试管还可以当作比色杯,最后直接放入分光光度计中比色。也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为ELISA固相载体的。其优点是表面积极大,反应在悬液中进行,其速率与液相反应近似。以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体,反应后用磁铁的吸引进行分离,洗涤方便,试剂盒一般均配以特殊仪器。(二)包被的方式将抗原
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