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| 细胞培养与转染 |
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文献和实验转染是将核酸导入真核细胞中的过程,是细胞生物学、基因表达和基因抑制实验中的关键步骤。转染是采用除病毒感染外的其他方法将核酸(DNA 或 RNA)人工导入细胞的过程。采用各种化学、生物学或物理方法导入外源性核酸会改变细胞的特性,从而实现细胞基因功能和蛋白质表达研究。 转染后,导入的核酸可以瞬时性地存在于细胞内,只表达一段时间且不会复制,也可以稳定地整合至受体基因组内,随着宿主基因组的复制而复制。 转染的目的 转染的两个主要目的是生成重组蛋白,或特异性地提升或抑制转染细胞中的基因表达。因此,转染
第三章 细胞培养和转染 1. 细胞培养(HEK293T) 1) 显微镜下观察细胞,细胞生长状态良好,去上清; 2) 加入预热的PBS 3ml, 温柔地清洗细胞,弃去PBS; 3) 用胰蛋白酶消化细胞,通常75cm2 培养瓶的贴壁细胞用3ml 胰蛋白酶于37oC 处理5min; 4) 待细胞脱落后,加入5ml DMEM 培养液(含10%FBS)以终止消化反应,并将 细胞悬液转移入15ml 或50ml 离心管中; 5) 1000rpm 离心5min,去除上清
happy0coral 哪位大侠能告诉我用pre-miR转染是属于瞬时还是稳定转染啊,另外是不是只要是转染就叫miRi啊 sxj_fish 很多基因都是可以转染的 ,DNA也可以转染,还有SIRNA也是可以转染的 芍药香 可以选用瞬时转染也可以选用稳定转染,不过现在microRNA的前体转染大多是瞬时的。 转染只是实验方法,应用于多种核酸的转入。
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