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- 2025年07月08日
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钰博生物
- 即用型SABC（过氧化物酶）试剂盒（Goat ）产品简介：
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是
一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即 StreptAvidin—Biotin Complex,。根据研究，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。 - 即用型SABC（过氧化物酶）试剂盒（Goat ）使用说明:
石蜡切片热修复抗原染色程序:
1. 载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60 ℃30-60分以使切片紧密粘
附。
2. 切片常规脱蜡至水。
3. 30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4． 热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾 后断电，间隔5-10
分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。
5. 滴加正常兔血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
6. 滴加适当稀释的一抗（山羊IgG），37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS
（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
7. 滴加生物素化兔抗山羊IgG,20-37℃ 20分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。
8. 滴加试剂SABC,20-37℃ 20分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5分钟×4次。
9. DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各1滴,混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。也可自配显色剂显色。蒸馏水洗涤。
10. 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
B. 石蜡切片酶消化程序:
以下面的步骤代替A程序中的第4步:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。
C. 石蜡切片不消化/不修复程序:
对于不需要微波修复或消化的抗原,省略A程序中的第4步即可。
D.血涂片，细胞和 冰冻切片染色程序：
1. 载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。
2. 固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定60-90分钟。
3. 30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温浸泡30分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2次。
其余步骤和石蜡切片5-10步相同。
如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热修复，方法和石蜡切片4-10步相
同。
即用型SABC（过氧化物酶）试剂盒（Goat ）
注意事项：
1. 如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。
2. 热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。
即用型SABC（过氧化物酶）试剂盒（Goat ）yb-1555R E.coli O139抗志贺毒素大肠杆菌O139抗体（仔猪水肿病志贺毒素大肠杆菌O139） 浓度1mg/ml
yb-2009R EGF表皮生长因子抗体 浓度1mg/ml
yb-2010R EGF表皮生长因子抗体 浓度1mg/ml
yb-3486R Phospho-EEF2 (Thr57)磷酸化真核翻译延长因子2抗体 浓度1mg/ml
yb-3612R EEF2k真核延伸因子激酶2抗体 浓度1mg/ml
yb-3487R Phospho-EEF2k (Ser366)磷酸化真核延伸因子激酶2抗体 浓度1mg/ml
yb-3613R eIF2 alpha真核启动因子2α抗体(eIFα2) 浓度1mg/ml
yb-3589R Phospho-eNOS (Thr113)磷酸化一氧化氮合成酶3（内皮型）抗体 浓度1mg/ml
yb-3611R EEF2真核翻译延长因子2抗体 浓度1mg/ml
yb-7359R ERG3癌基因ERG3抗体 浓度1mg/ml
yb-6994R Escherichka coli K88-K99猪源产肠毒素性大肠杆菌K88-K99抗体 浓度1mg/ml
yb-7527R FAIM3FAS凋亡抑制分子3抗体 浓度1mg/ml
yb-0796R Fascin1纤维束1抗体 浓度1mg/ml
yb-10211R FoxP3叉头蛋白P3抗体 浓度1mg/ml
yb-3511R FCGR1A免疫球蛋白G Fc段受体I 浓度1mg/ml
yb-2687R FOXM1叉头蛋白M1抗体 浓度1mg/ml
yb-3494R Phospho-FRAP1 (Ser2448)磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-3162R Phospho-FAK(Tyr576 + Tyr577)磷酸化粘着斑激酶抗体 浓度1mg/ml
yb-1462R FLG丝聚合蛋白/中间丝蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-0950R F1 operon positive regulatory protein肺鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白抗体（C端） 浓度1mg/ml
yb-1587R factor XIII凝血因子13抗体(纤维蛋白稳定因子) 浓度1mg/ml
yb-1766R FDC-SP滤泡树突细胞分泌蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-1767R FGF13纤维母细胞生长因子13抗体 浓度1mg/ml
yb-5159R Fast skeletal Myosin骨骼肌肌球蛋白轻链2抗体 浓度1mg/ml
yb-4521R FMDV Polyprotein (VP1 protein)口蹄疫病毒A型抗体(N端) 浓度1mg/ml
yb-1338R Fx1A肾刷状缘抗体 浓度1mg/ml
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文献和实验图： 用聚合标记方法将过氧化物酶连接到二抗上，形成类似于章鱼的超大分子抗体-酶聚合物 现对这两种方法进行比较： 一.材料 所选试剂： 即用型SABC(过氧化物酶)试剂盒(博士德货号SA1021，SA1022) 即用型SV(HRP辣根过氧化物酶)试剂盒(博士德货号SV0001，SV0002) DAB(黄色，博士德货号AR1022) Mayor`s苏木素(博士德货号AR0005) 所选一抗：
SABC 法与其他免疫组织化学染色方法比较 SP法或SAP法 该法由于用链霉亲和素替代ABC法中的亲和素―生物素复合物，因此背景清晰，敏感性增加，无非特异性染色，阳性反应易于辨认。是目前最常用的方法。在操作步骤中，与SABC法相比，仅有一个步骤不同，即试剂盒中的链霉菌抗生物素―过氧化物酶替代了亲和素―生物 素―过氧化物酶。因此无需使用生物素阻断剂消除内源性生物素。SP法与SAP法的区别在于前者的放大系统为链霉亲和素―过氧化物酶，后者是链霉亲和素―碱性磷酸酶，故导致
与其他免疫组化染色基本相似，有良好的可操作性。尽管SABC法操作简便，敏感性强，但是，在操作中仍然要遵循一定的原则，才能得到可信度高的结果。我所做的是《……》（题目略去，是2003年获国家自然科学基金专项基金项目，批准号：302400**）的动物实验部分。其中，需要利用抗β1-integrin观察深Ⅱ度烫伤大鼠局部在微电流治疗后β1-integrin的分布情况。应用的方法就是SABC法，试剂盒（即用型）来自博士德公司（不是为该公司做广告）。下面就按照实验步骤，谈一下我的一些体会。1、载玻片防脱片剂处理
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